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大分子蛋白作为pro肽引导外源基因在毕赤酵母中的分泌表达

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大分子蛋白作为pro肽引导外源基因在毕赤酵母中的分泌表达
论文目录
 
中文摘要第1-10 页
英文摘要第10-12 页
第一章 前言第12-14 页
第二章 材料与方法第14-33 页
  · 材料第14-20 页
    · 菌株第14 页
    · 质粒第14 页
    · 细胞株和病毒第14 页
    · 抗体及转移膜第14 页
    · 限制性内切酶及其他工具酶第14 页
    · 试剂盒第14-15 页
    · 核酸及蛋白分子量标准第15 页
    · 引物第15-16 页
    · 主要仪器第16 页
    · 主要生化试剂第16-17 页
    · 主要培养基第17 页
    · 主要溶液第17-20 页
  · 方法第20-33 页
    · 报告蛋白IFNα26 基因的克隆第20 页
    · 不含 Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆第20-21 页
    · 对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆第21 页
    · 缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆第21-22 页
    · 作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆第22-23 页
    · 重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建第23-24 页
    · 缺失pro 肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26 的构建第24-25 页
    · 大分子蛋白单独分泌表达载体prepro- pPIC9 的构建第25-26 页
    · 大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建第26-27 页
    · 大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建第27-28 页
    · 巴斯德毕赤酵母菌的电转化第28-29 页
    · 巴斯德毕赤酵母重组子甲醇利用表型的鉴定第29 页
    · 巴斯德毕赤酵母转化子在摇瓶里的诱导表达第29 页
    · 巴斯德毕赤酵母转化子表达上清的TCA 沉淀浓缩第29-30 页
    · IFNα26 的N 端氨基酸测序第30 页
    · IFNα26 的生物活性测定第30-31 页
    · 酵母胞内蛋白的提取第31 页
    · 胞内MBP 的Western-blot 分析第31-32 页
    · IFNα26 的ELISA 分析第32-33 页
第三章 实验结果第33-57 页
  · 报告蛋白IFNα26 基因的克隆第33 页
  · 不含Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆第33-34 页
  · 对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆第34-35 页
  · 缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆第35-36 页
  · 作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆第36-38 页
    · preHSA 融合基因的克隆第36-37 页
    · preMBP 融合基因的克隆第37-38 页
  · 重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建第38-39 页
  · 缺失pro肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26的构建第39-40 页
  · 大分子蛋白单独分泌表达载体pPIC9-prepro 的构建第40-42 页
    · pPIC9-preHSA 的构建第40-41 页
    · pPIC9-preMBP 的构建第41-42 页
  · 大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建第42-43 页
  · 大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建第43-44 页
  · HSA 作为pro 肽引导报告蛋白 IFNα26 分泌表达 Kex2p 酶切位点优化的表达载体的构建第44-45 页
  · 巴斯德毕赤酵母转化子及甲醇利用表性筛选第45-52 页
    · pPIC9-IFNα26 表达克隆的筛选第45 页
    · 缺失pro 肽的pPIC9-preIFNα26 的表达情况第45-46 页
    · pPIC9-preHSA表达克隆的筛选第46-47 页
    · pPIC9-preHSAIFNα26 表达克隆的筛选第47-48 页
    · pPIC9-preHSA-IFNα26 表达克隆的筛选第48-49 页
    · pPIC9-preHSA-IFNα26 Kex2p 酶切位点优化表达克隆的筛选第49-50 页
    · preMBP- pPIC9 表达克隆的筛选第50 页
    · pPIC9-preMBPIFNα26表达克隆的筛选第50-51 页
    · pPIC9-preMBP-IFNα26表达克隆的筛选第51-52 页
  · 工程菌pPIC9-preMBP-IFNα26/G5115 胞内MBP 的Western-blot 分析第52-53 页
  · IFNα26 的N 端氨基酸测序第53-55 页
  · MBP 作为pro 肽引导分泌IFNα26 的活性测定第55 页
  · MBP 作为pro 肽引导 IFNα26 分泌与αM 信号肽引导 IFNα26 分泌表达SDS-PAGE 对比分析第55-56 页
  · MBP 作为pro 肽引导IFNα26 分泌与αMF 信号肽引导IFNα26 分泌表达ELISA 定量分析第56-57 页
第四章 讨论第57-62 页
  · 酵母中存在两条分泌表达途径第57-58 页
  · pro肽在外源蛋白分泌表达中作用第58-59 页
  · 大分子蛋白作为pro 肽对外源蛋白分泌表达的影响第59-60 页
  · 巴斯德毕赤酵母菌的转化方法第60-62 页
结论第62-63 页
参考文献第63-67 页
致谢第67-68 页
发表文章第68-73 页
个人简历第73页

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