论文目录 | |
中文摘要 | 第1-10
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英文摘要 | 第10-12
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第一章 前言 | 第12-14
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第二章 材料与方法 | 第14-33
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· 材料 | 第14-20
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· 菌株 | 第14
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· 质粒 | 第14
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· 细胞株和病毒 | 第14
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· 抗体及转移膜 | 第14
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· 限制性内切酶及其他工具酶 | 第14
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· 试剂盒 | 第14-15
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· 核酸及蛋白分子量标准 | 第15
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· 引物 | 第15-16
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· 主要仪器 | 第16
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· 主要生化试剂 | 第16-17
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· 主要培养基 | 第17
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· 主要溶液 | 第17-20
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· 方法 | 第20-33
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· 报告蛋白IFNα26 基因的克隆 | 第20
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· 不含 Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆 | 第20-21
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· 对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆 | 第21
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· 缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆 | 第21-22
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· 作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆 | 第22-23
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· 重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建 | 第23-24
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· 缺失pro 肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26 的构建 | 第24-25
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· 大分子蛋白单独分泌表达载体prepro- pPIC9 的构建 | 第25-26
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· 大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建 | 第26-27
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· 大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建 | 第27-28
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· 巴斯德毕赤酵母菌的电转化 | 第28-29
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· 巴斯德毕赤酵母重组子甲醇利用表型的鉴定 | 第29
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· 巴斯德毕赤酵母转化子在摇瓶里的诱导表达 | 第29
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· 巴斯德毕赤酵母转化子表达上清的TCA 沉淀浓缩 | 第29-30
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· IFNα26 的N 端氨基酸测序 | 第30
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· IFNα26 的生物活性测定 | 第30-31
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· 酵母胞内蛋白的提取 | 第31
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· 胞内MBP 的Western-blot 分析 | 第31-32
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· IFNα26 的ELISA 分析 | 第32-33
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第三章 实验结果 | 第33-57
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· 报告蛋白IFNα26 基因的克隆 | 第33
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· 不含Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆 | 第33-34
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· 对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆 | 第34-35
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· 缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆 | 第35-36
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· 作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆 | 第36-38
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· preHSA 融合基因的克隆 | 第36-37
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· preMBP 融合基因的克隆 | 第37-38
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· 重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建 | 第38-39
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· 缺失pro肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26的构建 | 第39-40
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· 大分子蛋白单独分泌表达载体pPIC9-prepro 的构建 | 第40-42
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· pPIC9-preHSA 的构建 | 第40-41
页 |
· pPIC9-preMBP 的构建 | 第41-42
页 |
· 大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建 | 第42-43
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· 大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建 | 第43-44
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· HSA 作为pro 肽引导报告蛋白 IFNα26 分泌表达 Kex2p 酶切位点优化的表达载体的构建 | 第44-45
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· 巴斯德毕赤酵母转化子及甲醇利用表性筛选 | 第45-52
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· pPIC9-IFNα26 表达克隆的筛选 | 第45
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· 缺失pro 肽的pPIC9-preIFNα26 的表达情况 | 第45-46
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· pPIC9-preHSA表达克隆的筛选 | 第46-47
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· pPIC9-preHSAIFNα26 表达克隆的筛选 | 第47-48
页 |
· pPIC9-preHSA-IFNα26 表达克隆的筛选 | 第48-49
页 |
· pPIC9-preHSA-IFNα26 Kex2p 酶切位点优化表达克隆的筛选 | 第49-50
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· preMBP- pPIC9 表达克隆的筛选 | 第50
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· pPIC9-preMBPIFNα26表达克隆的筛选 | 第50-51
页 |
· pPIC9-preMBP-IFNα26表达克隆的筛选 | 第51-52
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· 工程菌pPIC9-preMBP-IFNα26/G5115 胞内MBP 的Western-blot 分析 | 第52-53
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· IFNα26 的N 端氨基酸测序 | 第53-55
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· MBP 作为pro 肽引导分泌IFNα26 的活性测定 | 第55
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· MBP 作为pro 肽引导 IFNα26 分泌与αM 信号肽引导 IFNα26 分泌表达SDS-PAGE 对比分析 | 第55-56
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· MBP 作为pro 肽引导IFNα26 分泌与αMF 信号肽引导IFNα26 分泌表达ELISA 定量分析 | 第56-57
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第四章 讨论 | 第57-62
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· 酵母中存在两条分泌表达途径 | 第57-58
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· pro肽在外源蛋白分泌表达中作用 | 第58-59
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· 大分子蛋白作为pro 肽对外源蛋白分泌表达的影响 | 第59-60
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· 巴斯德毕赤酵母菌的转化方法 | 第60-62
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结论 | 第62-63
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参考文献 | 第63-67
页 |
致谢 | 第67-68
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发表文章 | 第68-73
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个人简历 | 第73页 |