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传染性法氏囊病病毒VP2基因在酵母细胞内的表达及发酵工艺的最优化

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传染性法氏囊病病毒VP2基因在酵母细胞内的表达及发酵工艺的最优化
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
第一章 前言第9-31页
  1.1 传染性法式囊病(InfectIous bursal disease, IBD)概述第9-12页
  · 传染性法氏囊病病毒的介绍第12-17页
    · 传染性法氏囊病病毒的概述第12-14页
    1.2.2 IBDV 基因组结构第14-15页
    · 基因组编码蛋白的功能第15-17页
  1.3 IBDV 的变异和毒力第17-20页
  · 基因工程疫苗的研究进展第20-26页
    · 大肠杆菌系统表达第20页
    · 酵母系统表达第20-23页
    · 杆状病毒系统表达第23-24页
    · 构建活载体疫苗第24-25页
    1.4.5 IBDV 核酸疫苗的研究进展第25-26页
  · 免疫防治的策略第26-27页
  · 免疫失败的原因第27-28页
  1.7 我国目前 IBDV 的研究现状第28-29页
  · 本论文的目的和意义第29-31页
第二章 实验材料和方法第31-49页
  · 实验材料第31-32页
    · 实验仪器第31页
    2.1.2 IBDV 毒株、克隆载体、表达载体及宿主细胞第31页
    · 实验试剂和所用的酶第31-32页
  · 实验方法第32-49页
    2.2.1 利用 RT-PCR 技术提取 VP2 序列第32-35页
    2.2.2 将 RT-PCR 产物与 PMD18-T 相连第35页
    2.2.3 把克隆质粒中的 VP2 基因转入到表达载体 Ppicza 中第35-39页
    · 大肠杆菌感受态细胞的制备第39页
    2.2.5 将重组的表达质粒 Ppicza-VP2 转入大肠杆菌感受态细胞中第39页
    2.2.6 重组的表达质粒 Ppicza-VP2 转入大肠杆菌中的电泳确定第39-40页
    2.2.7 重组表达质粒 Ppicza-VP2 的序列鉴定第40页
    · 毕赤酵母感受态细胞的制备第40页
    2.2.9 把重组表达载体 Ppicza-VP2 转染到毕赤酵母感受态细染色体 DNA中第40-41页
    · 转染后酵母的扩大培养第41-42页
    · 用聚合酶链式反应确定转染是否成功第42-44页
    2.2.12 转染酵母细胞的 VP2 蛋白的诱导表达条件的最优化第44-47页
    2.2.13 从酵母细胞中提取 VP2 蛋白第47页
    2.2.14 用紫外分光光度计法测定 VP2 蛋白的含量第47-49页
第三章 实验结果第49-57页
  3.1 克隆载体 PMD18-VP2 序列测定结果第49页
  3.2 将 Ppicza-VP2 表达载体转入大肠杆菌的结果确定第49-52页
    3.2.1 经限制性内切酶 EcoRI 酶切电泳图第49-50页
    3.2.2 经限制性内切酶 XbaI+XSacI 酶切的电泳图第50-51页
    3.2.3 从大肠杆菌中提取 Ppicza-VP2 表达载体的序列分析第51-52页
  · 表达载体Ppicza-VP2转入毕赤酵母感受态细胞染色体DNA中的酶切确定第52-53页
  3.4 反应温度对诱导表达 VP2 蛋白的影响结果第53页
  3.5 反应转速对诱导 VP2 蛋白表达含量的影响第53-54页
  3.6 pH 对诱导表达 VP2 蛋白量的影响结果第54-55页
  3.7 诱导剂甲醇添加量对诱导 VP2 蛋白表达量的影响结果第55页
  · 正交实验确定最佳的反应温度、反应转速和诱导剂添加量第55-57页
第四章 分析与讨论第57-59页
  4.1 真核系统对 IBD VP2 蛋白表达的优势第57页
  4.2 表达载体 Ppicza 的优势第57页
  · 最佳反应条件的确定第57-58页
  · 本实验存在的缺点第58-59页
第五章 实验结论第59-61页
  · 分子微观方面的成果第59页
  5.2 用毕赤酵母表达系统表达 IBDV VP2 蛋白中试成果第59页
  · 酵母表达量为有效表达第59-61页
参考文献第61-69页
致谢第69-71页
攻读硕士期间发表的学术论文目录第71-72 页

本篇论文共72页,点击这进入下载页面
 
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