论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4
页 |
| Abstract | 第4-9
页 |
| 第一章 单核增多性李斯特菌研究进展 | 第9-16
页 |
| 1 致病机理 | 第9-10
页 |
| 2 单核增多性李斯特氏菌（LMO）的研究概况 | 第10-13
页 |
| · LMO 的发现 | 第10
页 |
| · 李斯特氏菌的分型 | 第10-12
页 |
| · LMO 的传统表型亚分型法 | 第11
页 |
| · LMO 的分子亚分型 | 第11-12
页 |
| · 形态与染色特性 | 第12
页 |
| · 生化特性 | 第12
页 |
| · 理化性质 | 第12-13
页 |
| 3 LMO 的检测方法 | 第13-14
页 |
| · 应用酶联免疫试验（ELISA）方法对该病的检测 | 第13-14
页 |
| · 应用分子生物学技术对该病的检测 | 第14
页 |
| · 核酸探针 | 第14
页 |
| · PCR 方法 | 第14
页 |
| 4 LMO 防治措施 | 第14-16
页 |
| · 加强饲养管理防治 | 第14-15
页 |
| · 疫苗药物防治 | 第15-16
页 |
| 第二章 单核增多性李斯特菌hly 基因的原核表达 | 第16-32
页 |
| 1 材料 | 第16-17
页 |
| · 菌株与质粒 | 第16
页 |
| · 菌株 | 第16
页 |
| · 质粒 | 第16
页 |
| · 试剂 | 第16-17
页 |
| · 分子生物学试剂 | 第16-17
页 |
| · 生化试剂 | 第17
页 |
| · 仪器设备 | 第17
页 |
| · 缓冲液和其他试剂溶液的配制 | 第17
页 |
| 2 试验方法 | 第17-25
页 |
| · hly 基因片段的克隆与序列分析 | 第17-21
页 |
| · 碱裂解法提取LMO 总DNA | 第17-18
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第18
页 |
| · PCR 扩增hly 基因 | 第18
页 |
| · 目的片段的回收 | 第18-19
页 |
| · PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第19
页 |
| · 感受态细胞的制备 | 第19
页 |
| · 连接产物的转化 | 第19-20
页 |
| · 重组质粒pMD18-T-hly 的提取与鉴定 | 第20-21
页 |
| · 序列分析 | 第21
页 |
| · hly 基因原核表达载体的构建 | 第21-24
页 |
| · 带有粘性末端hly 基因片段的制备 | 第21-22
页 |
| · 带有粘性末端原核表达载体pGEX-6P-1 的制备 | 第22
页 |
| · 目的片段hly 基因与线性化pEGX-6P-1 载体的连接 | 第22
页 |
| · 连接产物的转化 | 第22-23
页 |
| · 阳性重组质粒pGEX-6P-hly 的筛选 | 第23
页 |
| · 阳性重组质粒pGEX-6P-hly 的鉴定 | 第23-24
页 |
| · hly 基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-25
页 |
| · 大肠杆菌的诱导表达 | 第24
页 |
| · 重组蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第24-25
页 |
| · 免疫印迹鉴定（Western blotting） | 第25
页 |
| 3 结果 | 第25-29
页 |
| · hly 基因的PCR 扩增结果 | 第25-26
页 |
| · pMD18-T-hly 重组质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第26
页 |
| · hly 基因测序结果与序列分析 | 第26-28
页 |
| · 重组原核表达载体质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第28
页 |
| · 重组菌DH5α（pGEX-6p-1-hly）表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第28-29
页 |
| · 重组蛋白pGEX-6p-1-hly Western blotting 分析 | 第29
页 |
| 4 讨论 | 第29-32
页 |
| · hly 基因的克隆与序列分析 | 第29-30
页 |
| · hly 基因的原核表达 | 第30-31
页 |
| · 重组蛋白的Western-blot 分析 | 第31-32
页 |
| 第三章 单核增多性李斯特菌间接ELISA 检测方法的建立 | 第32-44
页 |
| 1 材料 | 第32
页 |
| · 菌株与试剂 | 第32
页 |
| · 菌株 | 第32
页 |
| · 试剂 | 第32
页 |
| · 仪器设备 | 第32
页 |
| 2 方法 | 第32-34
页 |
| · 抗原最佳包被液的选择 | 第32
页 |
| · 重组抗原最适包被浓度和血清最适稀释度的确定 | 第32-33
页 |
| · 酶标二抗最适稀释度的确定 | 第33
页 |
| · 最适封闭液的选择 | 第33
页 |
| · 封闭时间的优化 | 第33
页 |
| · 血清稀释液的选择 | 第33
页 |
| · 抗原和血清反应时间的优化 | 第33
页 |
| · 显色时间的优化 | 第33
页 |
| · 间接ELISA 方法操作程序的确定 | 第33
页 |
| · 间接ELISA 方法阳性临界值的确定 | 第33-34
页 |
| · 特异性和敏感性试验 | 第34
页 |
| · 交叉性试验 | 第34
页 |
| · 检测灵敏度试验 | 第34
页 |
| · 重复性试验 | 第34
页 |
| · 间接ELISA 方法的初步应用 | 第34
页 |
| 3 结果 | 第34-42
页 |
| · 抗原最佳包被液的选择 | 第34-35
页 |
| · 重组抗原最适包被浓度和血清最适稀释度的确定 | 第35
页 |
| · 诊断抗体最佳工作条件的测定 | 第35-36
页 |
| · 酶标二抗最适稀释度的确定 | 第36
页 |
| · 最适封闭液的选择 | 第36-37
页 |
| · 封闭时间的选择 | 第37
页 |
| · 血清稀释液的选择 | 第37-38
页 |
| · 抗原和血清作用时间的选择 | 第38
页 |
| · 显色时间的优化 | 第38
页 |
| · 间接ELISA 方法操作程序的确定 | 第38-39
页 |
| · 间接ELISA 方法阳性临界值的确定 | 第39
页 |
| · 特异性实验和敏感性实验 | 第39
页 |
| · 交叉性试验 | 第39-40
页 |
| · 间接ELISA 方法灵敏度检测 | 第40
页 |
| · 重复性试验 | 第40-41
页 |
| · 批内重复性试验 | 第40-41
页 |
| · 批间重复性试验 | 第41
页 |
| · 间接ELISA 方法的初步应用 | 第41-42
页 |
| 4 讨论 | 第42-44
页 |
| · LMO 检测方法的比较 | 第42
页 |
| · 间接ELISA 检测方法条件的优化 | 第42-43
页 |
| · 间接ELISA 检测方法的应用 | 第43-44
页 |
| 第四章 结论 | 第44-45
页 |
| 参考文献 | 第45-50
页 |
| 致谢 | 第50-51
页 |
| 附录 | 第51-58
页 |
| 英文缩略对照表 | 第51-52
页 |
| 常用试剂的配制 | 第52-58
页 |
| 作者简介 | 第58
页 |
