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传染性法氏囊病病毒浙江分离株(TL2004)全基因组的克隆及生物信息学分析

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传染性法氏囊病病毒浙江分离株(TL2004)全基因组的克隆及生物信息学分析
论文目录
 
摘要第1-9 页
ABSTRACT第9-11 页
第一部分 文献综述第11-36 页
  第一章 传染性法氏囊病病毒研究进展第12-36 页
    1 IBDV的一般生物学特征第12-13 页
      · IBDV的分类和地位第12 页
      · IBDV的理化特性第12 页
      · IBDV的细胞培养特征第12-13 页
      · IBDV的流行病学特征第13 页
    2 IBDV的分子生物学特征第13-27 页
      · IBDV的形态与结构第13-15 页
      · IBDV的基因组结构及编码的蛋白第15-22 页
        · 基因组非编码区第15-16 页
        · IBDV的基因组编码区第16-22 页
      · IBDV抗原与毒力变异的分子机制第22-24 页
      · IBDV的复制和繁殖第24-25 页
      · IBDV新型疫苗的研究第25-27 页
        · IBDV基因工程疫苗的研究第25-27 页
        · IBDVDNA疫苗的研究第27 页
    3 IBDV的检测技术第27-29 页
      · ELISA检测技术第28 页
      · PCR检测技术第28-29 页
    参考文献第29-36 页
第二部分 研究内容第36-68 页
  第一章 染性法氏囊病病毒野毒株的分离及鉴定第37-42 页
    1 材料第37-38 页
      · 病料及处理第37-38 页
      · 标准IBD阳性抗原和血清第38 页
    2 方法第38 页
      · 琼脂免疫扩散试验第38 页
      · 鸡胚接种及传代第38 页
      · 电镜观察第38 页
      · 组织病理学观察第38 页
    3 结果第38-40 页
      · 琼脂扩散试验第38-39 页
      · 病毒对鸡胚的致病性第39 页
      · 组织病理学观察结果第39-40 页
      · 电镜观察结果第40 页
    4 讨论第40-41 页
    参考文献第41-42 页
  第二章 传染性法氏囊病病毒(TL2004株)全基因组的克隆第42-52 页
    1 材料第42-43 页
      · 质粒与菌株第42-43 页
      · 试验用毒株第43 页
      · 主要试剂第43 页
      · 主要仪器第43 页
    2 方法第43-47 页
      · IBDV基因组的提取与纯化第43-44 页
        · 蛋白酶K法提取TL2004株基因组RNA第43 页
        · 病毒dsRNA的纯化第43-44 页
      · 引物设计和合成第44 页
      · Long-accurate RT-PCR扩增基因组全长cDNA第44-45 页
        · Long-accurate RT-PCR扩增基因组A节段全长cDNA第44 页
        · Long-accurate RT-PCR扩增基因组A节段全长cDNA第44-45 页
      · IBDV基因组A节段全长cDNA的克隆策略第45-47 页
        · 感受态细胞的制备第45 页
        · 低熔点胶回收PCR产物第45 页
        · 连接反应第45-46 页
        · 转化第46 页
        · 提取质粒DNA第46 页
        · 基因组A和B节段全长cDNA限制性酶切第46-47 页
        · 重组质粒的PCR鉴定第47 页
      · 序列测定第47 页
    3 结果第47-50 页
      · 病毒基因组的提取第47 页
      · IBDV基因组A和B节段的克隆与鉴定第47-48 页
        · LA-PCR扩增基因组A节段全长cDNA第47-48 页
        · LA-PCR扩增基因组B节段全长cDNA第48 页
      · IBDV全基因组的克隆第48-50 页
        · IBDV全基因组A节段全长的克隆第48-49 页
        · IBDV全基因组B节段全长的克隆第49-50 页
    4 讨论第50-51 页
    参考文献第51-52 页
  第三章 传染性法氏囊病病毒(TL2004株)基因组全长的生物信息学分析第52-68 页
    1 材料和方法第53 页
    2 结果第53-64 页
      · 全基因组5’-NCR和3’-NCR第53-57 页
      · VP1蛋白毒力位点的分析第57-58 页
      · ORF2及编码的VP5蛋白第58-60 页
      · 多聚蛋白VP2/VP4/VP3第60-61 页
      · 进化树分析第61-64 页
    3 讨论第64-66 页
      · IBDV A节段和B节段5’-NCR和3’-NCR的结构与功能第64 页
      · 关于IBDV抗原变异和毒力变异的分子基础第64-66 页
      · 关于TL2004株与其它毒株的亲缘关系分析第66 页
    参考文献第66-68 页
附录1 常用试剂及材料第68-71 页
附录2 硕士期间发表或录用论文第71-72 页
附 重组共表达载体PIL-18-IRES-IL-2的构建及在CEF细胞中的表达第72-78 页
  1 材料第74 页
    · 质粒和菌株第74 页
    · 主要试剂第74 页
  2 方法第74-75 页
    · 引物设计第74 页
    · CEF制备第74 页
    · 真核共表达质粒pIL-18-IRES-IL-2的构建第74-75 页
    · 重组质粒的细胞转染及表达第75 页
  3 结果第75-77 页
    · 引物设计和PCR扩增目的基因第75-76 页
    · 真核共表达质粒pIL-18-IRES-IL-2的构建第76 页
    · RT-PCR检测基因转录第76 页
    · 真核共表达质粒在CEF细胞中的瞬时表达第76-77 页
  4 讨论第77-78 页
参考文献第78-79 页
附录3 致谢第79 页

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