论文目录 | |
| 表格目录 | 第1-7
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| LIST OF TABLES | 第7-8
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| 插图目录 | 第8-10
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| LIST OF FIGURE | 第10-12
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| 摘要 | 第12-14
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| ABSTRACT | 第14-16
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| 第一章：文献综述—侵染葱属植物病毒病的研究进展 | 第16-41
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| 1.侵染葱属植物的马铃薯Y病毒属病毒 | 第16-26
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| · 洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus，OYDV) | 第17-21
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| · 韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus，LYSV) | 第21-24
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| · 葱黄条病毒(Shallot yellow stripe virus，SYSV) | 第24-26
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| · 薤花叶病毒(Scallion mosaic virus，ScaMV) | 第26
页 |
| 2.侵染葱属植物的香石竹潜隐病毒属病毒 | 第26-29
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| · 青葱潜隐病毒(Shallot latent virus，ShLV) | 第27-29
页 |
| · 大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latent virus，GarCLV) | 第29
页 |
| 3.侵染葱属植物的马铃薯X病毒属病毒 | 第29-30
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| · 薤X病毒(Scallion virus X，ScaVX) | 第29-30
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| 4.侵染葱属植物的葱X病毒属病毒 | 第30-36
页 |
| 参考文献 | 第36-41
页 |
| 第二章：葱属X病毒属主要成员外壳蛋白基因克隆表达、抗血清制备及其血清学研究 | 第41-64
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| 材料与方法 | 第42-51
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| 1 实验材料 | 第42-43
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| · 病样 | 第42
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| · 菌株和载体 | 第42
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| · 主要试剂和试剂盒 | 第42
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| · PCR引物 | 第42-43
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| 2 实验方法 | 第43-51
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| · 用RNeasy Plant mini(QIAGEN)试剂盒提取大蒜病叶总RNA | 第43
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| · 反转录合成cDNA第一链 | 第43
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| · CP基因的PCR扩增 | 第43-44
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| · PCR产物的切胶纯化 | 第44
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| · 克隆载体pGEM-CP的构建 | 第44-46
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| · PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第44
页 |
| · 感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第44
页 |
| · 转化 | 第44-45
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| · 阳性克隆的鉴定 | 第45-46
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| · 阳性克隆质粒DNA的制备 | 第45
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| · 阳性克隆PCR检测 | 第45
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| · DNA序列测定 | 第45-46
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| · 原核表达载体pSBET-CP的构建 | 第46-47
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| · 酶切与回收目的基因和表达载体片段 | 第46
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| · 目的基因片段与表达载体的连接 | 第46
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| · 阳性克隆的鉴定 | 第46-47
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| · IPTG诱导表达 | 第47
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| · SDS-PAGE检测目的基因的表达 | 第47-48
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| · 抗血清制备 | 第48-49
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| · 目的蛋白纯化 | 第48-49
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| · 免疫小鼠制备抗血清 | 第49
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| · 吸附去除非目的蛋白产生的抗体 | 第49
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| · Western blot检测抗血清纯度 | 第49-51
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| · SDS-PAGE | 第49
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| · Western blot | 第49-51
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| · 现有葱X病毒属成员CP抗血清间的血清学关系测定 | 第51
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| 结果与分析 | 第51-62
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| 1 PCR扩增GarV-A、GarV-B、GarV-C、GarV-D、GarV-E、GarV-X的CP基因 | 第51-53
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| · PCR扩增GarV-A、GarV-B、GarV-D、GarV-E、GarV-X的CP基因 | 第51-52
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| · GarV-C CP基因的扩增 | 第52-53
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| 2 CP基因的克隆和鉴定 | 第53-54
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| 3 CP基因的序列测定及分析 | 第54
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| 4 原核表达载体的构建与鉴定 | 第54-56
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| 5 原核表达产物的SDS-PAGE分析 | 第56
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| 6 抗血清的western blot检测 | 第56-59
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| 7 GarVA-CP、GarVB-CP、GarVC-CP、GarVD-CP、GarVE-CP、GarVX-CP的血清学关系研究 | 第59-62
页 |
| 讨论 | 第62-64
页 |
| 第三章:洋葱黄矮病毒和韭葱黄条病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗血清制备及其血清学关系研究 | 第64-71
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| 材料与方法 | 第64-67
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| 1.实验材料 | 第64-65
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| · 样品 | 第64
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| · 菌株和载体 | 第64
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| · 主要试剂和试剂盒 | 第64-65
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| · 引物 | 第65
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| 2.实验方法 | 第65-67
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| · 原核表达载体的构建 | 第65
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| · 抗血清的制备和Western blot分析 | 第65-66
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| 2.3田间样品的间接ELISA法检测 | 第66-67
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| 结果与分析 | 第67-69
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| 1 原核表达载体的构建和鉴定 | 第67
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| 2 OYDV和LYSV外壳蛋白基因的原核表达 | 第67-68
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| 3 抗血清的Western blot检测 | 第68-69
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| 4 间接ELISA法检测大蒜病样 | 第69
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| 讨论 | 第69-71
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| 第四章: 大蒜X病毒(GarV-X)全长cDNA克隆的构建 | 第71-78
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| 材料与方法 | 第71-75
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| 1.实验材料 | 第71-72
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| 2.实验方法 | 第72-73
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| 1.全长cDNA片段获得策略 | 第72
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| 2.P1、P2、P3、P4片段的获得 | 第72-73
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| · PCR扩增 | 第72-73
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| · 克隆载体pGEM-P1、pGFM-P2、pGEM-P3、pGEM-P4的构建 | 第73
页 |
| · PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第73
页 |
| · 感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第73
页 |
| · 转化 | 第73
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| · 阳性克隆的鉴定 | 第73
页 |
| · 阳性克隆质粒DNA的制备 | 第73
页 |
| · 4.2 阳性克隆PCR检测 | 第73
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| · DNA序列测定 | 第73
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| · 双酶切获得P1、P2、P3、P4片段 | 第73
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| 3 全长cDNA片段的拼接克隆 | 第73-75
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| 结果与分析 | 第75-77
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| 1 GVX-P1、GVX-P2、GVX-P3、GVX-P4片段的获得 | 第75
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| 2 全长cDNA片段的拼接克隆 | 第75-77
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| 讨论 | 第77-78
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| 第五章：主要结论与进一步研究建议 | 第78-79
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| 1.主要结论 | 第78
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| 2.进一步研究建议 | 第78-79
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| 参考文献 | 第79-81
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| 致谢 | 第81-82
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| 硕士期间形成的论文 | 第82
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