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STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选
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STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
插图和附表清单第11-12页
缩略表第12-13页
第一章 绪论第13-21页
　　· 猴嗜T淋巴白血病病毒STLV概况第13-17页
　　　　· STLV病毒学特点第13-14页
　　　　· STLV的类型和生物学特点第14-15页
　　　　· STLV的传播途径和流行概况第15-16页
　　　　· STLV检测技术研究进展第16-17页
　　· 昆虫杆状病毒表达系统概况第17-19页
　　· 研究目的和意义第19-21页
第二章 STLV病毒gag基因杆状病毒表达载体的构建第21-35页
　　· 引言第21页
　　· 材料与方法第21-23页
　　　　· 质粒和菌种第21页
　　　　· 主要试剂第21-22页
　　　　· 主要仪器第22-23页
　　· 技术路线第23页
　　· 实验方法第23-31页
　　　　· 引物第23-24页
　　　　· PCR反应扩增目的基因第24-25页
　　　　· 大肠杆菌感受态细胞的制备第25-26页
　　　　· 克隆载体PMD19-T-gag的构建第26-28页
　　　　· 重组表达质粒pFastBacHTB-gag的构建及鉴定第28-29页
　　　　· 重组杆粒Bacmid-gag的构建第29-31页
　　· 结果与分析第31-33页
　　　　· 重组质粒pFastBacHTB-gag的构建第31-32页
　　　　· 重组杆粒Bacmid-gag的PCR鉴定第32页
　　　　· 杆状病毒表达载体Bacmid-gag的浓度第32-33页
　　· 小结第33页
　　· 讨论第33-35页
　　　　· 载体的构建第33页
　　　　· 阳性对照的建立第33-35页
第三章 Gag蛋白在sf9昆虫细胞中的表达及纯化第35-49页
　　· 引言第35页
　　· 材料与方法第35-39页
　　　　· 主要试剂第35-39页
　　　　· 主要仪器第39页
　　· 实验方法第39-43页
　　　　· sf9细胞培养第39-40页
　　　　· 杆状病毒对sf9昆虫细胞的转染第40页
　　　　· 重组蛋白的表达第40-41页
　　　　· 重组蛋白的检测及鉴定第41页
　　　　· 表达产物的纯化及鉴定第41-43页
　　· 结果与分析第43-46页
　　　　· 细胞转染结果第43-44页
　　　　· 重组蛋白的SDS-PAGE分析第44-45页
　　　　· 重组蛋白的Western blot鉴定第45-46页
　　　　· 纯化后蛋白浓度的测定第46页
　　· 小结第46页
　　· 讨论第46-49页
　　　　· 昆虫细胞培养注意事项第46页
　　　　· 昆虫细胞转染第46-47页
　　　　· 重组蛋白的表达第47-48页
　　　　· 重组蛋白的纯化第48-49页
第四章 STLV-1间接ELISA方法的建立及应用第49-65页
　　· 引言第49页
　　· 材料第49-50页
　　　　· 抗原第49页
　　　　· 血清和酶标抗体第49页
　　　　· ELISA相关溶液第49-50页
　　　　· 主要仪器第50页
　　· 实验方法第50-53页
　　　　· 间接ELISA操作步骤第50-51页
　　　　· 抗原浓度和血清稀释度的确定第51页
　　　　· 最佳封闭液的确定第51页
　　　　· 最佳封闭时间的确定第51-52页
　　　　· 血清反应时间的确定第52页
　　　　· 酶标二抗工作浓度的确定第52页
　　　　· 最佳酶标二抗作用时间第52页
　　　　· 间接ELISA实验结果判定标准第52页
　　　　· 与商品化试剂盒的符合率检测第52页
　　　　· 间接ELISA方法的特异性评价第52-53页
　　　　· 间接ELISA方法的批内、批间重复性的评价第53页
　　· 结果与分析第53-62页
　　　　· 最佳抗原包被浓度和血清稀释度第53-54页
　　　　· 最佳封闭液的确定第54-55页
　　　　· 最佳封闭时间的确定第55-56页
　　　　· 一抗最佳作用时间第56-57页
　　　　· 酶标二抗最佳工作浓度第57-58页
　　　　· 酶标二抗最佳作用时间第58-59页
　　　　· 间接ELISA判定标准的确定第59-60页
　　　　· 与商品化试剂盒的符合率评价第60页
　　　　· 特异性评价第60-61页
　　　　· 批间及批内重复性实验检测结果第61-62页
　　· 小结第62页
　　· 讨论第62-65页
第五章 杂交瘤细胞的制备第65-75页
　　· 引言第65页
　　· 材料第65-66页
　　　　· 抗原第65页
　　　　· 实验动物与细胞第65页
　　　　· 主要试剂第65-66页
　　　　· 主要仪器第66页
　　· 实验方法第66-70页
　　　　· 动物免疫第66页
　　　　· 骨髓瘤细胞的制备第66页
　　　　· 饲养细胞的制备第66-67页
　　　　· 脾细胞制备第67页
　　　　· 细胞融合第67-68页
　　　　· 融合细胞的培养第68页
　　　　· 杂交细胞的筛选第68-69页
　　　　· 杂交瘤细胞的克隆化培养第69页
　　　　· 杂交瘤细胞的扩大培养第69页
　　　　· 杂交瘤细胞的冻存第69-70页
　　· 结果与分析第70-72页
　　　　· SP2/O细胞培养结果第70页
　　　　· 阳性杂交瘤细胞的筛选第70页
　　　　· 杂交瘤细胞株克隆化结果第70-72页
　　· 小结第72页
　　· 讨论第72-75页
　　　　· 动物免疫第72-73页
　　　　· 细胞的融合第73页
　　　　· 杂交瘤细胞的筛选第73-74页
　　　　· 杂交瘤细胞克隆化第74-75页
第六章 总结与展望第75-77页
　　· 本研究小结第75页
　　· 工作展望第75-77页
致谢第77-79页
参考文献第79-87页
附录A 攻读硕士期间发表论文目录第87-88页
附录B STLV-1 gag基因序列第88-89页
附录C PFastBacTM-HTB载体克隆位点图第89 页

本篇论文共89页，点击这进入下载页面。
 
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