论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 传染性法氏囊病 | 第11-12页 |
| 1.1.1 传染性法氏囊病的起源 | 第11页 |
| 1.1.2 传染性法氏囊病的临床症状及防制方法 | 第11-12页 |
| 1.1.3 我国传染性法氏囊病的流行 | 第12页 |
| 1.2 传染性法氏囊病病毒 | 第12-16页 |
| 1.2.1 IBDV的形态结构、理化特性、致病性及其血清型 | 第12-13页 |
| 1.2.2 IBDV基因组结构及其蛋白功能 | 第13-16页 |
| 1.2.2.1 编码区 | 第13-14页 |
| 1.2.2.2 非编码区 | 第14页 |
| 1.2.2.3 蛋白功能 | 第14-16页 |
| 1.3 RNA干扰研究概况 | 第16-23页 |
| 1.3.1 RNA干扰机制 | 第17-19页 |
| 1.3.2 RNA干扰的特点 | 第19页 |
| 1.3.3 慢病毒介导的RNA干扰研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.4 RNA干扰在抗病毒方面的作用 | 第22-23页 |
| 1.3.5 shRNA设计原则 | 第23页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 传染性法氏囊病毒核衣壳蛋白VP3单克隆抗体的制备 | 第24-40页 |
| 2.1 实验仪器和试剂 | 第24页 |
| 2.1.1 细胞、载体与菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 VP3原核表达载体的构建 | 第24-30页 |
| 2.2.2 VP3的诱导表达及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 BALB/c小鼠的免疫 | 第31页 |
| 2.2.4 融合瘤细胞的制备 | 第31-35页 |
| 2.2.5 VP3单抗的鉴定 | 第35页 |
| 2.2.5.1 VP3单抗的DotELISA鉴定 | 第35页 |
| 2.2.5.2 VP3单抗效价测定 | 第35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-38页 |
| 2.3.1 VP3基因的扩增以及原核表达载体的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.2 VP3小量诱导及大量纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.3 DotELISA鉴定单抗腹水 | 第37页 |
| 2.3.4 ELISA检测抗体效价 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 稳定干扰VP3基因表达的DF-1细胞系构建 | 第40-58页 |
| 3.1 实验仪器和试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.1 细胞载体和菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 分子生物学试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-54页 |
| 3.2.1 慢病毒干扰载体的构建 | 第41-49页 |
| 3.2.1.1 shRNA的设计与合成 | 第41-42页 |
| 3.2.1.2 VP3干扰载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.2.2.3 VP3表达载体pFlag-VP3的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.2.4 shRNA干扰效果测定 | 第46-49页 |
| 3.2.2.5 重组慢病毒表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2 慢病毒的包装及嘌呤霉素最适筛选浓度的确定 | 第49-51页 |
| 3.2.2.1 嘌呤霉素最适筛选浓度的确定 | 第49-50页 |
| 3.2.2.2 慢病毒的包装 | 第50页 |
| 3.2.2.3 慢病毒滴度测定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 DF-1稳定细胞系的构建及鉴定 | 第51-54页 |
| 3.2.3.1 DF-1稳定细胞系的构建 | 第51-53页 |
| 3.2.3.2 DF-1稳定细胞系的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 3.3.1 pFlag-VP3重组载体的菌液PCR以及双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.2 干扰效果Westernblot鉴定 | 第55页 |
| 3.3.3 稳定干扰VP3细胞系对病毒复制的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4 感染不同时间段病毒滴度测定 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第58-61页 |
| 4.1 讨论 | 第58-59页 |
| 4.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
