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人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备

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人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-10页
第一章 前言第10-20页
  · 细小病毒科简介第10-11页
    · 细小病毒科的发现及特征第10页
    · 细小病毒基因组结构的分类和基因组结构特征第10-11页
    · 细小病毒基因组的转录和表达第11页
  · 博卡病毒简介第11-15页
    · 人博卡病毒的发现、命名和分类第11-12页
    · 人博卡病毒基因组结构特征及临床性表现第12-13页
    · HBoV的研究现状第13-14页
    · 多克隆抗体制备的原理和特点第14-15页
  · PMAL原核表达系统第15-17页
    · pMAL原核表达系统简介(参考pMAL-c2X系统手册,NEB)第15-16页
    · 载体pMAL-c2X的相关信息第16-17页
  · PET原核表达系统第17-19页
    · pET原核表达系统简介第17页
    · 质粒pET28a的相关信息及克隆构建策略第17-18页
    · 原核表达载体pET28a克隆及表达的基本流程第18-19页
  · 本研究的目的和意义第19-20页
第二章 实验材料第20-25页
  · 主要仪器和实验材料第20页
    · 主要实验仪器和设备第20页
    · 菌株和质粒第20页
    · 试剂第20页
  · 常用培养基第20-21页
    · LB液体培养基第20页
    · 配制LB固体培养基第20-21页
    · 配制含葡萄糖的液体培养基第21页
  · 常用溶液和它们的配置第21-23页
    · 配置琼脂糖凝胶电泳缓冲液第21页
    · 碱性裂解法提取质粒DNA所用试剂第21页
    · SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)所用溶液第21-22页
    · Western blot相关缓冲液第22页
    · 蛋白纯化时所用试剂第22-23页
    · 酶联免疫吸附技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assa,ELISA)相关缓冲液第23页
  · 透析缓冲液第23页
    · 透析袋处理液第23页
    · 透析缓冲液第23页
  · 各种抗生素第23-25页
    · 氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)第23-24页
    · 卡那霉素(kalamycin,kana)第24页
    · 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-ThiogalactopyranosideIPTG)第24页
    · 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranoside,X-Gal)第24-25页
第三章 实验方法第25-30页
  · 人博卡病毒(HBoV)结构蛋白独特区基因VP1u和非结构蛋白未知区域基因ORFx,基因NP1的克隆及原核表达第25-28页
    · 设计与合成引物第25页
    · 重组表达质粒的构建及鉴定第25-26页
    · 诱导并表达融合蛋白第26-27页
    · SDS-PAGE检测第27页
    · Western-Blot鉴定融合蛋白第27-28页
  · 多克隆抗体的制备和它们的检测第28-30页
    · 融合蛋白MBP-NP1,MBP-ORFx,MBP-VP1u的大量制备及Amylose亲和层析柱纯化(参照PMAL纯化手册,NEB)第28页
    · 多克隆抗体的制备第28-29页
    · 多克隆抗体效价测定及Western-Blot分析第29-30页
第四章 实验结果第30-48页
  · 人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白基因NP1,ORFx,结构蛋白基因VP1u的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备第30-37页
    · 结构蛋白基因VP1u的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备第30-37页
  · 非结构蛋白基因ORFx的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备第37-42页
    · PCR扩增目的片段ORFx第37-38页
    · 重组表达载体pMAL-ORFx的构建及鉴定第38-39页
    · 融合蛋白MBP-ORFx的诱导表达及Western blot检测第39-40页
    · 融合蛋白MBP-ORFx的纯化第40-41页
    · Factor Xa对MBP-ORFx融合蛋白的酶切第41页
    · 多克隆抗体的Western blot分析第41-42页
  · 非结构蛋白基因NP1的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备第42-48页
    · PCR扩增目的片段NP1第42-43页
    · 重组表达载体pMAL-c2X-NP1的构建及鉴定第43-44页
    · 融合蛋白MBP-NP1的诱导表达及条件优化第44-45页
    · 融合蛋白MBP-NP1的纯化及Western blot分析第45-46页
    · Factor Xa对MBP-NP1融合蛋白酶切及抗体特异性检测第46-48页
第五章 讨论第48-50页
参考文献(REFERENCES)第50-54页
硕士期间发表论文第54-55页
致谢第55页

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