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利用RNAi分析水稻化感作用关键酶PAL基因的功能

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利用RNAi分析水稻化感作用关键酶PAL基因的功能
论文目录
 
摘要第1-9页
ABSTRACT第9-10页
·前言第10-26页
  · 水稻化感作用及其研究意义第11页
  · 化感作用的研究现状第11-19页
    · 在种质资源筛选方面第12页
    · 在化感作用的评价方法第12页
    · 化感物质的提取、纯化和鉴定第12-13页
    · 化感物质的种类第13-14页
    · 化感作用机制研究第14-15页
      · 抑制杂草种子发芽第14页
      · 干扰激素平衡第14页
      · 破坏膜的完整性第14页
      · 影响光合作用第14页
      · 影响呼吸作用第14-15页
      · 影响杂草对养分和水分的吸收第15页
    · 化感水稻的根际微生物研究第15页
    · 环境胁迫下的化感作用及其诱导机制第15-19页
      · 碳素/营养平衡(Carbon/Nutrient Balance,CNB)假说第16页
      · 生长/分化平衡(Growth/Diferentiation Balance,GDB)假说第16页
      · 最佳防御(Optimum Defense,OD)假说第16-17页
      · 资源获得(Resource Availability,RA)假说第17-19页
  · 逆境条件下水稻化感作用潜力变化的机理研究第19-20页
  ·与本研究相关的RNA干扰技术及其应用第20-26页
    · 作用机制第21-22页
    · 特点第22-23页
    · 应用第23-24页
      · RNAi技术在功能基因组中的应用第23页
      · RNA干扰技术是研究信号传导通路的新途径第23页
      · RNA干扰的封闭功能第23页
      · RNA干扰治疗人类疾病第23-24页
      · RNA干扰在植物抗病毒上的应用第24页
      · RNA在植物品质改良中的作用第24页
    · 本研究的意义与相关研究内容第24-26页
·材料与方法第26-32页
  · 实验材料第26页
    · 植物材料第26页
    · 常用分子生物学载体与试剂第26页
  · 实验方法第26-32页
    · 实验常用方法第26-28页
      · CTAB提取水稻基因组DNA第26-27页
      · 水稻叶片RNA的抽提--Trizol法第27页
      · 载体构建中的酶切、连接和回收第27页
      · 质粒DNA的提取第27页
      · 大肠杆菌感受态细胞的制备第27页
      · 大肠杆菌细胞的热激法转化第27-28页
      · 根癌农杆菌感受态细胞制备第28页
      · 农杆菌细胞的冻融法转化第28页
    · PAL基因片段的确定第28页
    · 水稻RNAi载体的构建第28-29页
      · PAL基因片段序列的扩增第28页
      · PAL基因片段序列的回收以及与克隆载体的连接与测序第28页
      · 表达载体PTCK-303-S的获得第28页
      · 表达载体PTCK-303-S-A的获得第28-29页
      · PAL基因RNAi载体PTCK-303-S-A的农杆菌转化和转化子的鉴定第29页
    · 农杆菌介导的水稻遗传转化第29页
      · 水稻的组织培养第29页
      · 水稻的转化第29页
    · 转基因水稻的检测第29页
      · GUS染色第29页
      · PCR验证第29页
    · 荧光定量PCR分析目的基因的表达第29-30页
      · 组织总RNA制备以及纯度、完整性鉴定第29-30页
      · 微量基因组DNA的去除第30页
      · cDNA合成第30页
      · FQ-PCR(两步法PCR扩增)第30页
    · 水稻PAL酶活性的测定第30页
    · 水稻化感抑草潜力的检测第30-32页
      · 试验Ⅰ第30-31页
      · 试验Ⅱ第31-32页
3 结果与分析第32-42页
  · 水稻PAL候选基因片段第32页
    · PAL候选基因片段的确定第32页
  · 水稻RNAi载体的构建第32-35页
    · PAL候选基因片段的克隆与测序第32-33页
    · 表达载体PTCK-303-S的构建与检测第33-34页
    · 表达载体PTCK-303-S-A的构建与检测第34-35页
    · PAL基因RNAi载体PTCK-303-S-A的农杆菌转化和转化子的鉴定第35页
  · 转基因水稻的检测第35-37页
    · GUS染色第35-36页
    · PCR验证第36-37页
  · 荧光定量PCR分析目的基因的表达第37-38页
    · RNA纯度和完整性检测第37页
    · 代谢途径中PAL基因FQ-PCR扩增曲线与融解曲线分析第37页
    · 不同氮素条件下水稻苯丙烷代谢基本途径PAL基因表达的定量分析第37-38页
  · PAL酶活性的测定:第38-39页
  ·不同水稻化感潜力分析第39-42页
4 讨论与结论第42-45页
  · RNAi技术的可行性第42页
  · 候选PAL基因可能的作用第42-43页
  · 候选PAL基因不同遗传转化方法的比较第43-44页
  · 下一步的工作第44-45页
参考文献:第45-50页
附录第50-53页
  附录1 分子生物学实验中的体系建立:第50-51页
    PAL基因片段PCR扩增体系:第50页
    酶切体系:第50页
    连接体系:第50-51页
  附录2 本研究所用基本培养基配方第51页
    1、YEB培养基第51页
    2、LB培养基第51页
  附录3 缩写词第51-53页
致谢第53页

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