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植物耐盐相关基因GarCIPK、SbHKT1的克隆与功能分析

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植物耐盐相关基因GarCIPK、SbHKT1的克隆与功能分析
论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-12页
缩略词及中英文对照第12-13页
第一部分 文献综述第13-27页
  1 盐胁迫下植物应对机理第13-15页
    · 细胞的渗透调节第13-14页
      · 无机盐离子吸收和分布第13-14页
      · 合成积累有机溶质第14页
      · 水通道蛋白的调节作用第14页
    · 清除活性氧的膜保护系统第14-15页
    · 光合作用途径第15页
    · 盐胁迫信号传导途径第15页
  2 Ca~(2+)及相关蛋白第15-21页
    · CBL家族及其靶蛋白CIPK家族第16-21页
      · CBL家族及其结构特征第16-17页
      · CBL特异性相互作用蛋白CIPK家族第17-18页
      · CBL-CIPK复合体参与各种逆境胁迫的信号转导第18-21页
        · CBL-CIPK信号途径在盐胁迫下转导的分子调控机制第19-20页
        · CBL-CIPK信号途径在低钾胁迫下应答的途径第20页
        · CBL-CIPK信号途径在干旱胁迫下转导的分子调控机制第20-21页
        · CBL-CIPK信号参与其他胁迫应答的途径第21页
  3 HKT类蛋白第21-25页
    · HKT转运蛋白的初步研究第22页
    · HKT的结构与功能第22-24页
    · HKT蛋白的K~+/Na~+选择性与植物抗盐性第24-25页
  4 研究内容、意义及技术路线第25-27页
    · 研究内容及意义第25-26页
    · 技术路线第26-27页
第二部分 研究报告第27-85页
  第一章 棉属野生种旱地棉(Gossypium aridum)蛋白磷酸激酶基因GarCIPK的克隆与序列分析第27-49页
    1 实验材料第27页
      · 植物材料第27页
      · 菌种第27页
    2 仪器设备、酶及试剂第27-29页
      · 仪器与设备第27-28页
      · 试剂第28页
      · 常用培养基和溶液的配制第28页
      · 实验中所用的引物第28-29页
    3 实验方法第29-36页
      · 不同盐处理时期目的基因在旱地棉的叶片、根中的表达情况第29-30页
        · 植物材料处理方法第29页
        · cDNA的合成第29-30页
          · RNA提取第29-30页
          · cDNA第一链的合成第30页
      · 旱地棉叶片基因组DNA的提取与纯化第30-31页
      · 实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)第31-32页
      · GarCIPK cDNA的获得第32-33页
      · GarCIPK基因组DNA全长获得第33页
      · 回收DNA片段与T载体连接、转化第33-35页
        · PCR产物的回收与纯化第33-34页
        · 回收的PCR产物与PTG19-T连接及转化大肠杆菌、挑单克隆PCR、测序第34-35页
      · 系统进化分析第35-36页
      · 激酶结构域Action NAF结构域比对分析第36页
    4 结果与分析第36-46页
      · 蛋白磷酸激酶基因GarCIPK的克隆第36-46页
        · 旱地棉RNA及cDNA检测第36-37页
        · 实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)第37-38页
        · GarCIPK基因cDNA序列的克隆第38页
        · GarCIPK蛋白质氨基酸序列生物信息学分析第38-44页
          · 系统进化及氨基酸序列分析第38-40页
          · 蛋白结构域分析第40-44页
        · GarCIPK基因组及启动子序列分析第44-46页
    5 讨论第46-49页
  第二章 GarCIPK基因功能的初步鉴定第49-71页
    1 试验材料第49页
      · 植物材料第49页
      · 质粒和菌种第49页
    2 仪器设备与试剂第49-50页
      · 仪器与设备第49页
      · 培养基及常用试剂的配置第49-50页
        · 植物生长调节剂及抗生素的配置第49-50页
        · 组织培养用培养基及水培营养液第50页
    3 实验方法第50-60页
      · 构建载体所用引物第50页
      · pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK植物表达载体的构建第50-53页
        · PCR扩增GarCIPK片段第51页
        · 纯化的PCR产物双酶切、割胶回收第51页
        · 载体pCAMBIA2301-CaMV35S-rbc的质粒提取,酶切及胶回收第51-53页
        · pCAMBIA2301载体与GarCIPK酶切片段的连接和转化第53页
      · 拟南芥逆境胁迫特异启动子RD29A表达载体的构建第53-54页
      · 植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK和pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的鉴定第54页
      · 农杆菌EHA105热激感受态的制备、转化和鉴定第54-55页
      · 植物表达载体对烟草的转化第55-59页
        · 农杆菌菌液的活化第55页
        · 叶盘化法侵染烟草第55-56页
        · 转基因烟草的PCR检测第56-57页
        · 转基因烟草RT-PCR检测第57-59页
      · 转基因烟草功能的初步验证第59-60页
        · 转基因烟草的表型鉴定第59-60页
    4 结果与分析第60-68页
      · 植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK、pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的构建第60-62页
        · 植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK的构建第60-61页
        · 植物表达载体pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的构建第61-62页
      · 农杆菌转化检测第62-63页
      · 转基因烟草抗性苗的获得和检测第63-66页
        · 转基因烟草抗性植株的PCR检测第63-65页
        · 转基因烟草阳性植株的RT-PCR检测第65-66页
      · 转基因植株的抗逆性鉴定第66-68页
    5 讨论第68-71页
  第三章 海篷子高亲和K~+转运体SbHKT1基因的功能鉴定及在棉花中的遗传转化第71-85页
    1 材料与方法第71-72页
      · 实验材料第71-72页
    2 仪器设备与酶、试剂第72页
      · 仪器、酶、培养基及常用试剂的配置第72页
      · 实验用的引物第72页
    3 实验方法第72-77页
      · 植物表达载体对烟草的转化第72页
        · 农杆菌菌液的活化第72页
        · 叶盘化法侵染烟草第72页
        · 转基因烟草PCR及RT-PCR检测第72页
      · 植物表达载体对棉花的转化第72-73页
        · 培养基第72-73页
          · 农杆菌培养基第72-73页
          · 棉花组培培养基第73页
      · Southern杂交分析第73-77页
        · 基因组DNA的提取第73-74页
        · 试剂及其配制第74-75页
        · 基因组DNA的酶切第75-76页
        · 地高辛标记探针第76页
        · 转膜第76页
        · 杂交与洗膜第76-77页
    4 结果与分析第77-83页
      · 转基因烟草抗性苗的获得和检测第77-80页
        · 转基因烟草抗性植株的PCR检测第77-78页
        · 转基因烟草阳性植株的RT-PCR检测第78-79页
        · 转SbHKT1基因烟草的耐盐性鉴定第79-80页
      · SbHKT1基因在棉花中的遗传转化研究第80-83页
        · 转基因棉花抗性植株的PCR检测第80-81页
        · 转基因棉花阳性植株的RT-PCR检测第81-82页
        · Southern杂交分析转基因棉花植株第82-83页
    5 讨论第83-85页
全文结论与创新点第85-87页
参考文献第87-97页
附录第97-101页
致谢第101-103页
攻读硕士期间发表的学术论文及研究成果第103 页

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