论文目录 | |
致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-10页 |
1 文献综述 | 第10-17页 |
· 能量限制的作用和意义 | 第10页 |
· 肉仔鸡免疫器官及其功能 | 第10-12页 |
· 能量限制对生产性能的影响 | 第12页 |
· 能量限制对免疫器官及其功能的影响 | 第12-13页 |
· 能量限制对差异表达基因的影响 | 第13页 |
· 目前研究差异表达基因的方法 | 第13-17页 |
· 传统的研究差异表达基因的方法 | 第14页 |
1.6.2 mRNA 差异显示技术及其他差异基因分析方法 | 第14-15页 |
1.6.3 ACP~(TM)技术和 GeneFishing~(TM)DEG Premix Kits | 第15-17页 |
2 试验设计 | 第17-19页 |
· 研究的目的和意义 | 第17页 |
· 研究内容及方法 | 第17-18页 |
· 技术路线 | 第18-19页 |
3 试验材料与方法 | 第19-29页 |
· 材料与方法 | 第19-29页 |
· 试验材料 | 第19-20页 |
· 试验样本 | 第19页 |
· 试验主要仪器 | 第19页 |
· 主要试剂 | 第19-20页 |
· 工具酶及试剂盒 | 第20页 |
· 试验方法 | 第20-29页 |
· 常用试剂配置 | 第20-21页 |
3.1.2.2 固体和液体 LB 培养基的制备 | 第21页 |
3.1.2.3 GenFishing~(TM)DEG Premix Kit 试剂盒中引物 | 第21-22页 |
3.1.2.4 脾脏和法氏囊总 RNA 的提取和质量检测方法 | 第22页 |
3.1.2.4.1 脾脏和法氏囊总 RNA 的提取 | 第22页 |
3.1.2.4.2 脾脏和法氏囊总 RNA 浓度测定 | 第22页 |
3.1.2.5 GeneFishing~(TM)RT—PCR 操作方法 | 第22-23页 |
· 反转录方法 | 第23页 |
3.1.2.7 反转录得 cDNA 检测方法 | 第23-24页 |
3.1.2.8 GeneFishing~(TM)差异显示 PCR 方法 | 第24-25页 |
· 差异片段回收、克隆、测序方法 | 第25-26页 |
3.1.2.10 半定量 RTPCR 二次验证方法 | 第26-28页 |
· 差异表达基因序列分析方法 | 第28-29页 |
4 结果与分析 | 第29-56页 |
· 能量限制对肉仔鸡脾脏差异表达基因的影响 | 第29-43页 |
4.1.1 脾脏总 RNA 的提取、纯化与检测 | 第29页 |
4.1.2 脾脏差异表达 EST | 第29-38页 |
4.1.2.1 第一链 cDNA 质量的检测 | 第29-30页 |
4.1.2.2 GeneFishing~(TM)RTPCR 获得的脾脏差异显示片段 | 第30-38页 |
· 差异表达基因的生物信息学分析 | 第38-43页 |
4.1.3.1 差异表达 EST 在 NCBI 网站进行的 EST 搜索 | 第38-41页 |
4.1.3.2 差异表达 EST 在 NCBI 网站进行 BLAST 搜索 | 第41-43页 |
· 能量限制对肉仔鸡法氏囊差异表达基因的影响 | 第43-56页 |
4.2.1 法氏囊总 RNA 的提取、纯化与检测 | 第43-44页 |
4.2.2 法氏囊差异表达 EST | 第44-52页 |
4.2.2.1 第一链 cDNA 质量检测 | 第44页 |
4.2.2.2 法氏囊 GeneFishingTM差异显示 RT-PCR 电泳结果 | 第44-52页 |
· 差异表达基因的生物信息学分析 | 第52-56页 |
4.2.3.1 差异表达 EST 在 NCBI 网站进行 BLAST 搜索结果 | 第52-54页 |
4.2.3.2 差异表达 EST 在 NCBI 网站进行 BLAST 搜索 | 第54-56页 |
5 讨论 | 第56-60页 |
5.1 RNA 质量要求及对后期实验结果的影响 | 第56页 |
5.2 GeneFishing~(TM)RT—PCR 反应 | 第56-58页 |
· 基因差异表达研究技术 | 第56-57页 |
5.2.2 GeneFishingTMRT—PCR 差异表达结果 | 第57-58页 |
5.3 半定量 RT-PCR 验证差异表达基因 | 第58-59页 |
5.4 获得的差异表达 EST 序列分析 | 第59-60页 |
6 结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-69页 |
附录 | 第69-78页 |
附录 1 脾脏差异表达片段克隆测序 | 第69-73页 |
附录 2 法氏囊差异表达克隆序列 | 第73-78页 |
Abstract | 第78-79
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