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白菜与十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物互作蛋白的筛选

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白菜与十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物互作蛋白的筛选
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-13页
第一章 前言第13-28页
  · 白菜和十字花科黑腐病菌简介第13-14页
    · 白菜简介第13页
    · 十字花科黑腐病菌简介第13-14页
  · 植物病原菌与植物的相互作用机理第14-17页
    · 植物免疫第14-15页
    · 植物PTI途径第15页
    · 植物ETI途径第15-16页
    · 植物病原菌与植物的易感性第16-17页
  · Ⅲ型分泌系统第17-21页
    · 与Ⅲ型分泌系统相关的基因及蛋白第17-19页
      · hrp基因和hrc基因第17-18页
      · avr基因第18页
      · 效应物基因和R基因第18-19页
    · Ⅲ型分泌系统第19-20页
    · Ⅲ型效应物第20-21页
  · 蛋白质与蛋白质之间相互作用的研究方法第21-27页
    · 细菌双杂交技术第21-22页
      · 细菌双杂交的原理及分类第21-22页
      · 细菌双杂交的特点第22页
    · 噬菌体展示技术第22-23页
    1.4.3 GST pull-down实验第23-24页
    · 免疫共沉淀(Co-IP)第24页
    · 酵母双杂交系第24-27页
      · 酵母双杂交系统的基本原理第25-26页
      · 酵母双杂交系统的应用第26页
      · 酵母双杂交系统的特点第26-27页
  · 研究内容、目的和意义第27-28页
    · 研究内容第27页
    · 研究目的和意义第27-28页
第二章 材料与方法第28-50页
  · 质粒及菌株第28-29页
  · 引物第29-30页
  · 培养基和试剂第30-31页
  · 抗生素使用浓度第31页
  · 诱饵载体的构建第31-38页
    2.5.1 Xcc 8004总DNA的提取第31-32页
    · 外源片段扩增第32页
    · pGBKT7诱饵质粒的构建第32-33页
    · 化学法转化到大肠杆菌DH5α第33-34页
      · 化学感受态细胞的制备第33页
      · 化学法转化第33-34页
    · 阳性转化子的验证第34-35页
      · 大肠杆菌菌落PCR第34-35页
      · 双酶切验证第35页
    · 诱饵质粒的测序第35页
    · 诱饵载体转化入酵母Y187菌株第35-37页
      · 酵母感受态的制备第35-36页
      · 酵母感受态的转化第36-37页
      · 酵母菌落PCR验证第37页
    · 自激活检测第37页
    · 毒性检测第37-38页
  · cDNA文库的构建第38-46页
    2.6.1 pGADT7-Rec SmaI单酶切质粒的大量制备第38-39页
    2.6.2 Xcc 8004侵染宿主白菜叶片总RNA的提取第39-40页
      2.6.2.1 Xcc 8004侵染宿主白菜叶片第39页
      · 侵染叶片总RNA的提取第39-40页
    · mRNA的分离纯化第40-41页
    · 第一链cDNA的合成第41-42页
    · 第二链的扩增第42-43页
    · 第二链的纯化第43页
    · cDNA文库的转化第43-44页
    · cDNA文库的收获第44-45页
    · cDNA文库的质量检测第45-46页
      · cDNA文库转化效率第45页
      · cDNA文库重组效率第45-46页
      · cDNA文库滴度第46页
  · 酵母双杂交第46-47页
    · 诱饵质粒菌株Y187的制备第46页
    · 酵母双杂交第46-47页
  · 候选基因的筛选鉴定第47-50页
    · 阳性克隆的筛选第47页
    · 酵母AH109菌落PCR方法进行初筛第47页
    · 酶切验证第47页
    · 测序第47-48页
    · 诱饵质粒和相应的文库质粒进行一对一的回转验证第48页
    · 阳性克隆子的β-半乳糖苷酶活的测定第48-49页
    · 阳性克隆子序列的分析第49-50页
第三章 结果与分析第50-72页
  · pGBKT7融合质粒的构建第50-51页
    · 外源片段扩增第50页
    · pGBKT7融合质粒第50-51页
    · pGBKT7融合质粒测序第51页
  · 诱饵载体转化入酵母Y187菌株的自激活检测第51-52页
  · 诱饵载体转化入酵母Y187菌株的毒性检测第52-53页
  · cDNA文库的构建第53-55页
    · 侵染叶片总RNA的提取及mRNA的分离纯化第53-54页
    · 第一链cDNA的合成和第二链的扩增第54-55页
  3.5 Xcc 8004侵染宿主白菜cDNA文库的质量检测第55-57页
  · 候选基因的筛选鉴定第57-61页
    · 酵母双杂交结果第57页
    · 阳性克隆的筛选第57-58页
    · 酵母菌落PCR方法初步排除重复的克隆子第58-60页
    · HindⅢ限制性内切酶酶切文库质粒进行进一步鉴定第60-61页
  · 插入片段测序第61-63页
  · 诱饵质粒与相应文库质粒一对一的回转验证第63-66页
  · 阳性克隆子的β-半乳糖苷酶活的测定第66-67页
  · 靶标序列的生物学分析第67-72页
第四章 总结与讨论第72-77页
  · 研究内容总结第72-73页
  · 候选靶蛋白和Ⅲ型效应物相互作用的分析第73-75页
  · 关于候选蛋白第75-77页
参考文献第77-88页
附录第88-97页
致谢第97 页

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