论文目录 | |
摘要 | 第1-4页 |
abstract | 第4页 |
第一章 引言 | 第9-21页 |
1.1 叶绿素a的生物合成 | 第10-15页 |
1.2 光作为诱导因素的重要性 | 第15页 |
1.3 不依赖光的原叶绿素酸酯氧化还原酶的还原机制 | 第15-17页 |
1.4 NADPH:原叶绿素酸酯氧化还原酶(LPOR)被子植物中的“关键酶”的表征 | 第17-18页 |
1.5 LPOR起源于蓝细菌 | 第18-19页 |
1.6 本课题的选题依据及创新性 | 第19-21页 |
第二章 实验材料与方法 | 第21-26页 |
2.1 实验材料 | 第21页 |
2.1.1 菌种 | 第21页 |
2.1.2 表达载体 | 第21页 |
2.2 蛋白表达与纯化 | 第21-23页 |
2.2.1 蛋白表达流程 | 第21-22页 |
2.2.2 蛋白纯化 | 第22-23页 |
2.2.3 凝胶过滤层析 | 第23页 |
2.3 蛋白晶体初筛和优化 | 第23-24页 |
2.3.1 晶体筛选 | 第23页 |
2.3.2 晶体优化 | 第23-24页 |
2.4 数据收集与结构解析 | 第24页 |
2.5 ITC实验 | 第24页 |
2.6 荧光淬灭实验 | 第24-25页 |
2.7 圆二色谱实验 | 第25页 |
2.8 原叶绿素酸酯(Pchlide)的制备 | 第25-26页 |
第三章 集胞藻原叶绿素酸酯氧化还原酶( SyLPOR)的结构生物学研究 | 第26-41页 |
3.1 SyLPOR蛋白表达载体的构建 | 第26-27页 |
3.1.1 SyLPOR的序列分析 | 第26-27页 |
3.1.2 SyLPOR蛋白构建的表达载体 | 第27页 |
3.2 SyLPOR蛋白的表达和纯化 | 第27-29页 |
3.2.1 试表达 | 第27-28页 |
3.2.2 SyLPOR蛋白的纯化 | 第28-29页 |
3.3 SyLPOR蛋白晶体生长 | 第29页 |
3.4 SyLPOR-NADPH蛋白复合物晶体生长 | 第29-36页 |
3.4.1 晶体数据收集、处理和建模 | 第31-34页 |
3.4.2 SyLPOR-NADPH的晶体结构分析 | 第34-36页 |
3.5 SyLPOR-NADPH-Pchlide蛋白复合物制备 | 第36页 |
3.6 SyLPOR与底物类似物蛋白复合物晶体筛选 | 第36-37页 |
3.7 SyLPOR蛋白与相关因子的生化实验 | 第37-41页 |
3.7.1 SyLPOR与 NADPH的 ITC实验 | 第37-38页 |
3.7.2 SyLPOR与NADPH的荧光淬灭实验 | 第38-39页 |
3.7.3 SyLPOR与 NADPH、NEM的圆二色谱实验 | 第39-41页 |
第四章 嗜热聚球藻原叶绿素酸酯氧化还原酶(TeLPOR)的结构生物学研究 | 第41-53页 |
4.1 TeLPOR蛋白表达载体的构建 | 第41-42页 |
4.1.1 TeLPOR的序列分析 | 第41-42页 |
4.1.2 TeLPOR蛋白构建的表达载体 | 第42页 |
4.2 TeLPOR蛋白的表达和纯化 | 第42-44页 |
4.2.1 试表达 | 第42页 |
4.2.2 TeLPOR蛋白的纯化 | 第42-44页 |
4.3 TeLPOR蛋白晶体生长 | 第44页 |
4.4 TeLPOR-NADPH蛋白复合物晶体生长 | 第44-49页 |
4.4.1 晶体数据收集,处理,建模 | 第46-48页 |
4.4.2 TeLPOR-NADPH二元复合物晶体的结构分析 | 第48-49页 |
4.5 TeLPOR与底物类似物蛋白复合物晶体筛选 | 第49页 |
4.6 TeLPOR蛋白与相关因子的生化实验 | 第49-53页 |
4.6.1 TeLPOR与NADPH的ITC实验 | 第49-50页 |
4.6.2 TeLPOR与NADPH的荧光淬灭实验 | 第50-51页 |
4.6.3 TeLPOR与NADPH、NEM的圆二色谱实验 | 第51-53页 |
第五章 LPOR-NADPH的结构分析与预测 | 第53-60页 |
5.1 结构分析 | 第53-58页 |
5.1.1 二体不是LPOR的功能状态 | 第54-55页 |
5.1.2 确定了Pchlide的结合口袋 | 第55-57页 |
5.1.3 NADPH的结合位点 | 第57-58页 |
5.2 一种新的质子传递途径模型 | 第58-60页 |
第六章 总结与展望 | 第60-63页 |
6.1 总结 | 第60-62页 |
6.2 展望 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-71页 |
附录 | 第71-75页 |
致谢 | 第75-76页 |
攻读硕士期间发表的论文 | 第76页 |