论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-33页 |
| 1.1 手足口病简介 | 第11-15页 |
| 1.1.1 手足口病的临床症状 | 第11-12页 |
| 1.1.2 手足口病的致病机制 | 第12页 |
| 1.1.3 手足口病的流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.4 手足口病的疫苗 | 第13-15页 |
| 1.2 肠道病毒71型简介 | 第15-23页 |
| 1.2.1 EV71的分类 | 第15页 |
| 1.2.2 EV71的基因组结构 | 第15-17页 |
| 1.2.3 EV71的理化性质 | 第17页 |
| 1.2.4 EV71的复制周期 | 第17-19页 |
| 1.2.5 EV71的流行病学 | 第19-20页 |
| 1.2.6 细胞对EV71的免疫应答 | 第20-23页 |
| 1.3 内质网应激 | 第23-28页 |
| 1.3.1 未折叠蛋白反应的途径 | 第23-25页 |
| 1.3.2 内质网应激与病毒感染的关系 | 第25-28页 |
| 1.4 生物信息学在病毒领域的应用 | 第28-32页 |
| 1.5 实验目的 | 第32-33页 |
| 第二章 实验材料 | 第33-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第33-35页 |
| 2.2 实验所用仪器设备 | 第35页 |
| 2.3 实验相关试剂的配置 | 第35-39页 |
| 2.3.1 分子实验相关试剂配制 | 第36-37页 |
| 2.3.2 细胞实验相关试剂配制 | 第37页 |
| 2.3.3 蛋白印迹实验相关试剂配制 | 第37-39页 |
| 第三章 实验方法 | 第39-53页 |
| 3.1 常规分子克隆实验 | 第39-42页 |
| 3.1.1 PCR引物设计原则 | 第39页 |
| 3.1.2 利用PCR技术扩增目的片段 | 第39-40页 |
| 3.1.3 PCR产物的胶回收 | 第40页 |
| 3.1.4 目的产物和载体的双酶切 | 第40页 |
| 3.1.5 连接反应 | 第40页 |
| 3.1.6 转化 | 第40-41页 |
| 3.1.7 菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| 3.1.8 重组质粒的提取以及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2 细胞学实验 | 第42-45页 |
| 3.2.1 细胞的复苏 | 第42页 |
| 3.2.2 细胞的换液及传代培养 | 第42-43页 |
| 3.2.3 细胞冻存 | 第43页 |
| 3.2.4 转染实验 | 第43-44页 |
| 3.2.5 Western blot操作 | 第44-45页 |
| 3.3 病毒学实验 | 第45-47页 |
| 3.3.1 病毒扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.2 病毒滴度的测定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 病毒感染细胞 | 第47页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR实验 | 第47-50页 |
| 3.4.1 RNA的提取 | 第47-48页 |
| 3.4.2 去除基因组的DNA反应 | 第48页 |
| 3.4.3 RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 3.4.4 RNA反转录成cDNA | 第49页 |
| 3.4.5 Real Time PCR反应 | 第49-50页 |
| 3.5 生物信息学分析 | 第50-53页 |
| 3.5.1 序列来源 | 第50-51页 |
| 3.5.2 EV71系统进化树分析 | 第51-52页 |
| 3.5.3 EV71基因重组分析 | 第52-53页 |
| 第四章 实验结果 | 第53-76页 |
| 4.1 一株重组病毒株的生物进化树及重组分析 | 第53-62页 |
| 4.1.1 病毒分离株的生物进化树分析 | 第53-58页 |
| 4.1.2 病毒分离株的重组分析 | 第58-62页 |
| 4.1.3 病毒分离株对不同细胞的感染性研究 | 第62页 |
| 4.2 EV71感染细胞对UPR通路的影响 | 第62-67页 |
| 4.2.1 EV71病毒感染细胞引起IRE1α的磷酸化 | 第62-63页 |
| 4.2.2 EV71病毒感染细胞不激活Spliced XBP1mRNA的切割 | 第63-65页 |
| 4.2.3 EV71感染细胞引起IRE1α的降解 | 第65-66页 |
| 4.2.4 EV71感染细胞引起PERK的磷酸化 | 第66-67页 |
| 4.3 IRE1α的激酶及核酸内切酶活性对病毒复制的影响 | 第67-72页 |
| 4.3.1 TCID50法 | 第67-70页 |
| 4.3.2 Western Blot和Q-PCR法 | 第70-72页 |
| 4.4 EV71病毒蛋白与IRE1α的磷酸化的初步探究 | 第72-76页 |
| 4.4.1 EV71十个蛋白的构建及表达 | 第72-73页 |
| 4.4.2 EV71病毒3D蛋白与IRE1α-XBP1通路的初步研究 | 第73-76页 |
| 第五章 总结与展望 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 硕士研究生期间科研成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
