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产甘油假丝酵母酸调控启动子及其应用研究

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产甘油假丝酵母酸调控启动子及其应用研究
论文目录
 
摘要第1-6页
abstract第6-11页
第1章 绪论第11-23页
  1.1 工业微生物酸胁迫应激机制第11-15页
    1.1.1 酸胁迫第11-12页
    1.1.2 细胞对酸胁迫的应激反应第12-14页
    1.1.3 提高抗酸胁迫策略第14页
    1.1.4 产甘油假丝酵母酸耐受性研究第14-15页
  1.2 启动子研究进展第15-18页
    1.2.1 启动子结构及功能第15-17页
    1.2.2 常用酵母启动子研究第17页
    1.2.3 诱导启动子动态调控第17-18页
  1.3 发酵法生产乳酸第18-20页
    1.3.1 微生物发酵生产乳酸第18-19页
    1.3.2 基因工程法改良乳酸生产菌株第19-20页
  1.4 本课题研究意义及主要内容第20-23页
    1.4.1 研究意义第20页
    1.4.2 主要研究内容第20-23页
第2章 产甘油假丝酵母酸调控启动子的筛选第23-39页
  2.1 材料与仪器设备第23-24页
    2.1.1 菌株及质粒第23页
    2.1.2 培养基第23页
    2.1.3 主要试剂第23-24页
    2.1.4 主要仪器设备第24页
  2.2 方法第24-30页
    2.2.1 产甘油假丝酵母与酿酒酵母酸耐受性测定第24-25页
    2.2.2 酵母总RNA的提取和反转录第25-26页
    2.2.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)第26-27页
    2.2.4 目的基因的扩增第27-29页
    2.2.5 PCR产物的回收及连接第29-30页
  2.3 结果与分析第30-37页
    2.3.1 产甘油假丝酵母与酿酒酵母酸耐受性差异分析第30-32页
    2.3.2 酸胁迫应答基因及其调控启动子的获得第32-35页
    2.3.3 酸调控启动子生物信息学分析第35-37页
  2.4 小结与讨论第37-39页
第3章 酸调控启动子性能分析第39-55页
  3.1 材料与实验仪器第39-41页
    3.1.1 菌株及质粒第39-40页
    3.1.2 培养基第40页
    3.1.3 主要试剂第40页
    3.1.4 主要仪器设备第40-41页
  3.2 方法第41-44页
    3.2.1 酵母染色体DNA的提取第41页
    3.2.2 大肠杆菌感受态的制备、转化与质粒提取第41-42页
    3.2.3 绿色荧光蛋白检测及分析第42页
    3.2.4 C.glycerinogenes转化方法第42-43页
    3.2.5 整合表达载体pURGFP构建验证第43页
    3.2.6 酸诱导启动子整合表达载体构建验证第43页
    3.2.7 S.cerevisiae表达载体构建验证第43-44页
  3.3 结果与分析第44-53页
    3.3.1 酸调控启动子验证载体构建第44-48页
    3.3.2 GFP在酸调控启动子下的诱导表达第48-52页
    3.3.3 酸调控启动子诱导条件分析第52-53页
  3.4 小结与讨论第53-55页
第4章 利用PCGGMT调控乳酸合成关键基因第55-67页
  4.1 材料与仪器设备第55-56页
    4.1.1 菌株及质粒第55页
    4.1.2 培养基第55页
    4.1.3 主要试剂第55-56页
    4.1.4 主要仪器设备第56页
  4.2 方法第56-59页
    4.2.1 乳酸合成关键酶基因克隆第56页
    4.2.2 质粒构建第56-57页
    4.2.3 乳酸脱氢酶比酶活测定第57-58页
    4.2.4 产物测定方法第58-59页
  4.3 结果分析第59-65页
    4.3.1 乳酸合成关键基因的克隆分析及质粒构建第59-62页
    4.3.2 利用PCgGMT调控C.glycerinogenes合成乳酸第62-65页
  4.4 小结与讨论第65-67页
结论第67-68页
参考文献第68-75页
附录第75-81页
攻读硕士学位期间取得的学术成果第81-83页
致谢第83页

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