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甲酸脱氢酶基因的合成表达与定点突变

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甲酸脱氢酶基因的合成表达与定点突变
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第1章 绪论第11-20页
  1.1 本课题研究的背景及意义第11页
  1.2 国内外研究现状第11-19页
    1.2.1 甲酸脱氢酶的主要来源与同源性分析第11-12页
    1.2.2 甲酸脱氢酶的主要性质第12-13页
    1.2.3 甲酸脱氢酶的催化机理及动力学研究第13-14页
    1.2.4 甲酸脱氢酶的基因克隆与表达第14-15页
    1.2.5 甲酸脱氢酶的蛋白质工程第15-18页
    1.2.6 甲酸脱氢酶的应用第18-19页
  1.3 本课题的研究内容第19-20页
第2章 甲酸脱氢酶基因的合成和原核表达第20-45页
  2.1 材料与仪器第20-22页
    2.1.1 试验所需药品第20-21页
    2.1.2 主要仪器设备第21页
    2.1.3 菌株及载体第21页
    2.1.4 培养基第21页
    2.1.5 试剂盒第21-22页
  2.2 实验方法第22-32页
    2.2.1 琼脂糖凝胶电泳第22-23页
    2.2.2 甲酸脱氢酶基因的合成第23-24页
    2.2.3 DNA的纯化回收第24-25页
    2.2.4 克隆载体fdh-PEASY-T1的构建及测序第25-29页
    2.2.5 原核表达载体pETfdh的构建第29-30页
    2.2.6 甲酸脱氢酶基因的原核表达第30-32页
  2.3 结果与讨论第32-44页
    2.3.1 fdh基因合成第32-34页
    2.3.2 克隆载体fdh-PEASY-T1的构建及鉴定第34-40页
    2.3.3 表达载体的构建及鉴定第40-42页
    2.3.4 SDS-PAGE分析第42-43页
    2.3.5 粗酶比酶活的测定第43-44页
  2.4 本章小结第44-45页
第3章 甲酸脱氢酶基因在毕赤酵母X33中的表达第45-64页
  3.1 材料和仪器第45页
    3.1.1 实验所需药品第45页
    3.1.2 实验所需仪器第45页
    3.1.3 培养基第45页
  3.2 实验方法第45-52页
    3.2.1 fdh的基因克隆第45-46页
    3.2.2 毕赤酵母穿梭载体pGAPZfdh的构建第46-47页
    3.2.3 毕赤酵母的转化第47-50页
    3.2.4 毕赤酵母转化子的筛选第50-51页
    3.2.5 甲酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达第51-52页
  3.3 结果与讨论第52-63页
    3.3.1 fdh基因克隆第52页
    3.3.2 重组载体pGAPZ-fdh鉴定第52-54页
    3.3.3 氯化锂转化结果第54页
    3.3.4 PCR鉴定第54-55页
    3.3.5 转化子的筛选第55-61页
    3.3.6 蛋白含量检测第61-63页
  3.4 本章小结第63-64页
第4章 甲酸脱氢酶基因的定点突变第64-78页
  4.1 材料和仪器第64页
    4.1.1 试验所需要品第64页
    4.1.2 实验仪器第64页
  4.2 实验方法第64-67页
    4.2.1 引物设计第64-65页
    4.2.2 定点突变第65-67页
    4.2.3 克隆载体的构建第67页
    4.2.4 粗提质粒方法第67页
    4.2.5 突变体表达载体的构建第67页
  4.3 结果与讨论第67-76页
    4.3.1 甲酸脱氢酶基因的定点突变、片段搭接及鉴定第67-69页
    4.3.2 TA克隆及鉴定第69-71页
    4.3.3 突变体表达载体的构建及鉴定第71-72页
    4.3.4 DNA序列测定、分析及比对第72-75页
    4.3.5 突变酶活及稳定性研究第75-76页
  4.4 本章小结第76-78页
结论第78-79页
参考文献第79-84页
致谢第84页

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