甲酸脱氢酶基因的合成表达与定点突变 |
论文目录 | | 摘要 | 第1-6页 | Abstract | 第6-11页 | 第1章 绪论 | 第11-20页 | 1.1 本课题研究的背景及意义 | 第11页 | 1.2 国内外研究现状 | 第11-19页 | 1.2.1 甲酸脱氢酶的主要来源与同源性分析 | 第11-12页 | 1.2.2 甲酸脱氢酶的主要性质 | 第12-13页 | 1.2.3 甲酸脱氢酶的催化机理及动力学研究 | 第13-14页 | 1.2.4 甲酸脱氢酶的基因克隆与表达 | 第14-15页 | 1.2.5 甲酸脱氢酶的蛋白质工程 | 第15-18页 | 1.2.6 甲酸脱氢酶的应用 | 第18-19页 | 1.3 本课题的研究内容 | 第19-20页 | 第2章 甲酸脱氢酶基因的合成和原核表达 | 第20-45页 | 2.1 材料与仪器 | 第20-22页 | 2.1.1 试验所需药品 | 第20-21页 | 2.1.2 主要仪器设备 | 第21页 | 2.1.3 菌株及载体 | 第21页 | 2.1.4 培养基 | 第21页 | 2.1.5 试剂盒 | 第21-22页 | 2.2 实验方法 | 第22-32页 | 2.2.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 | 2.2.2 甲酸脱氢酶基因的合成 | 第23-24页 | 2.2.3 DNA的纯化回收 | 第24-25页 | 2.2.4 克隆载体fdh-PEASY-T1的构建及测序 | 第25-29页 | 2.2.5 原核表达载体pETfdh的构建 | 第29-30页 | 2.2.6 甲酸脱氢酶基因的原核表达 | 第30-32页 | 2.3 结果与讨论 | 第32-44页 | 2.3.1 fdh基因合成 | 第32-34页 | 2.3.2 克隆载体fdh-PEASY-T1的构建及鉴定 | 第34-40页 | 2.3.3 表达载体的构建及鉴定 | 第40-42页 | 2.3.4 SDS-PAGE分析 | 第42-43页 | 2.3.5 粗酶比酶活的测定 | 第43-44页 | 2.4 本章小结 | 第44-45页 | 第3章 甲酸脱氢酶基因在毕赤酵母X33中的表达 | 第45-64页 | 3.1 材料和仪器 | 第45页 | 3.1.1 实验所需药品 | 第45页 | 3.1.2 实验所需仪器 | 第45页 | 3.1.3 培养基 | 第45页 | 3.2 实验方法 | 第45-52页 | 3.2.1 fdh的基因克隆 | 第45-46页 | 3.2.2 毕赤酵母穿梭载体pGAPZfdh的构建 | 第46-47页 | 3.2.3 毕赤酵母的转化 | 第47-50页 | 3.2.4 毕赤酵母转化子的筛选 | 第50-51页 | 3.2.5 甲酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第51-52页 | 3.3 结果与讨论 | 第52-63页 | 3.3.1 fdh基因克隆 | 第52页 | 3.3.2 重组载体pGAPZ-fdh鉴定 | 第52-54页 | 3.3.3 氯化锂转化结果 | 第54页 | 3.3.4 PCR鉴定 | 第54-55页 | 3.3.5 转化子的筛选 | 第55-61页 | 3.3.6 蛋白含量检测 | 第61-63页 | 3.4 本章小结 | 第63-64页 | 第4章 甲酸脱氢酶基因的定点突变 | 第64-78页 | 4.1 材料和仪器 | 第64页 | 4.1.1 试验所需要品 | 第64页 | 4.1.2 实验仪器 | 第64页 | 4.2 实验方法 | 第64-67页 | 4.2.1 引物设计 | 第64-65页 | 4.2.2 定点突变 | 第65-67页 | 4.2.3 克隆载体的构建 | 第67页 | 4.2.4 粗提质粒方法 | 第67页 | 4.2.5 突变体表达载体的构建 | 第67页 | 4.3 结果与讨论 | 第67-76页 | 4.3.1 甲酸脱氢酶基因的定点突变、片段搭接及鉴定 | 第67-69页 | 4.3.2 TA克隆及鉴定 | 第69-71页 | 4.3.3 突变体表达载体的构建及鉴定 | 第71-72页 | 4.3.4 DNA序列测定、分析及比对 | 第72-75页 | 4.3.5 突变酶活及稳定性研究 | 第75-76页 | 4.4 本章小结 | 第76-78页 | 结论 | 第78-79页 | 参考文献 | 第79-84页 | 致谢 | 第84页 |
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