论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-20页 |
| 0.1 硒和硒蛋白 | 第13-17页 |
| 0.1.1 硒 | 第13页 |
| 0.1.2 硒的分类 | 第13-14页 |
| 0.1.3 硒蛋白及其分类 | 第14-16页 |
| 0.1.4 果蝇硒蛋白dSelK的研究进展及意义 | 第16-17页 |
| 0.2 细胞凋亡的研究现状 | 第17-19页 |
| 0.3 钙离子荧光探针 | 第19-20页 |
| 第1章 人硒蛋白SelK-secis融合蛋白表达质粒的构建 | 第20-31页 |
| 1.1 实验方案 | 第20-21页 |
| 1.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.2.1 分子生物学常用酶 | 第21页 |
| 1.2.2 菌种与质粒 | 第21页 |
| 1.2.3 实验用仪器 | 第21-22页 |
| 1.2.4 常用试剂 | 第22-23页 |
| 1.3 实验方法 | 第23-27页 |
| 1.3.1 载体pGFP-SelK-secis-Cl和pE-Dsred2-Cl的双酶切 | 第23-24页 |
| 1.3.2 凝胶回收(TaKaRa DNA凝胶回收试剂盒) | 第24-25页 |
| 1.3.3 目的片段的连接(TaKaRa T4 DNA ligase说明书) | 第25页 |
| 1.3.4 感受态细胞的制备及转化(TSB法) | 第25-26页 |
| 1.3.5 菌种保存 | 第26页 |
| 1.3.6 小量碱裂解法提取重组质粒 | 第26-27页 |
| 1.3.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 1.4 实验结果 | 第27-30页 |
| 1.4.1 真核表达质粒pDsred2-SelK-secis-C1的构建 | 第27-30页 |
| 1.5 分析与讨论 | 第30页 |
| 1.6 小结 | 第30-31页 |
| 第2章 人硒蛋白SelK对人胃癌细胞凋亡及钙稳态的影响 | 第31-47页 |
| 2.1 实验方案 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.2.1 细胞 | 第31页 |
| 2.2.2 菌种和质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.3 培养基及抗生素 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 2.3.1 细胞培养及传代 | 第33页 |
| 2.3.2 细胞复苏 | 第33-34页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第34页 |
| 2.3.4 脂质体转染 | 第34-35页 |
| 2.3.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第35页 |
| 2.3.6 钙离子荧光探针(Fluo-3AM)配制 | 第35页 |
| 2.3.7 细胞的钙离子荧光探针Fluo-3 AM染色 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-45页 |
| 2.4.1 质粒pDsred2-SelK-secis-Cl转染BGC-823细胞后激光共聚焦显微镜照片 | 第36页 |
| 2.4.2 质粒pDsred2-SelK-secis-Cl转染BGC-823细胞后流式细胞仪检测结果 | 第36-38页 |
| 2.4.3 质粒pDsred2-SelK-secis-Cl转染BGC-823细胞后钙离子浓度变化的荧光显微镜检测 | 第38页 |
| 2.4.4 质粒pE-SelK-Dsred2-N1转染HEK293细胞后钙离子浓度变化的激光共聚焦显微镜照片 | 第38-40页 |
| 2.4.5 质粒pDsred2-SelK-secis-Cl转染BGC-823细胞后钙离子浓度变化 | 第40-45页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第45-46页 |
| 2.6 小结 | 第46-47页 |
| 第3章 果蝇硒蛋白dSelK对人胃癌细胞凋亡及钙稳态的影响 | 第47-59页 |
| 3.1 实验方案 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-49页 |
| 3.3.1 细胞培养及传代 | 第48页 |
| 3.3.2 脂质体转染 | 第48页 |
| 3.3.3 射电镜观察亚细胞结构 | 第48页 |
| 3.3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第48页 |
| 3.3.5 细胞的钙离子荧光探针Fluo-3 AM染色,流式细胞仪检测 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-57页 |
| 3.4.1 质粒pE-dSelK-GFP-N1转染BGC-823细胞后激光共聚焦显微镜检测 | 第49页 |
| 3.4.2 质粒pE-dSelK-Dsred2-N1转染BGC-823细胞后的透射电子显微镜检测 | 第49-54页 |
| 3.4.3 pE-dSelK-Dsred2-N1转染BGC-823细胞后流式细胞仪检测凋亡率 | 第54-56页 |
| 3.4.4 pE-dSelK-Dsred2-N1转染BGC-823细胞后流式细胞仪检测钙变化 | 第56-57页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第57页 |
| 3.6 小结 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 创新点 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第67页 |
