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抗菌肽Dybowskin-2CDYa和hEGF在大肠杆菌中融合表达的研究
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抗菌肽Dybowskin-2CDYa和hEGF在大肠杆菌中融合表达的研究
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-14页
引言
第14-27页
0.1 概述
第14-15页
0.2 抗菌肽的主要特征
第15-18页
0.2.1 一般特征
第15-16页
0.2.2 抗菌肽的分类及结构特点
第16-18页
0.3 抗菌肽的作用机制
第18-19页
0.3.1 抗菌肽作用机制研究
第18-19页
0.3.2 对正常的真核细胞无作用的原因
第19页
0.4 抗菌肽的生物学活性
第19-21页
0.4.1 抗菌肽对细菌的作用
第19-20页
0.4.2 抗菌肽对病毒的作用
第20页
0.4.3 抗菌肽对真菌的作用
第20页
0.4.4 抗菌肽对某些原生动物的抑制作用
第20-21页
0.4.5 抗菌肽对抑制肿瘤细胞的作用
第21页
0.4.6 抗菌肽的其它生物学功能
第21页
0.5 抗菌肽的应用前景
第21-23页
0.5.1 药用前景
第22页
0.5.2 食品工业应用前景
第22页
0.5.3 农业工程应用前景
第22-23页
0.5.4 畜牧水产养殖业应用前景
第23页
0.6 抗菌肽基因工程表达策略
第23-25页
0.6.1 原核表达的优势
第23-24页
0.6.1.1 大肠杆菌表达系统
第24页
0.6.1.2 pET表达系统
第24页
0.6.2 抗菌肽的原核表达策略
第24-25页
0.6.2.1 密码子偏爱性
第25页
0.6.2.2 串联表达
第25页
0.6.2.3 融合表达
第25页
0.7 本文目的与意义
第25-27页
第1章 Dybowskin-2CDYa原核融合表达载体的构建
第27-46页
1.1 引言
第27-28页
1.2 实验材料
第28-30页
1.2.1 菌株、质粒
第28页
1.2.2 实验试剂
第28页
1.2.3 主要仪器
第28-29页
1.2.4 溶液与培养基的配制
第29-30页
1.3 实验方法
第30-39页
1.3.1 实验策略
第30-31页
1.3.2 融合多肽基因序列设计
第31-32页
1.3.3 引物设计
第32-33页
1.3.4 SOE-PCR法扩增融合多肽基因序列
第33-35页
1.3.5 重组表达质粒的构建
第35-39页
1.3.5.1 粘性末端的制备
第35-36页
1.3.5.2 酶切产物的连接
第36-37页
1.3.5.3 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备
第37页
1.3.5.4 重组质粒的转化
第37-38页
1.3.5.5 阳性重组子的筛选
第38-39页
1.3.5.6 重组质粒的制备
第39页
1.3.5.7 阳性重组质粒的测序与分析
第39页
1.4 结果
第39-43页
1.4.1 融合肽基因序列的获得
第40-41页
1.4.2 粘性末端的制备结果
第41页
1.4.3 阳性重组质粒的PCR鉴定结果
第41-42页
1.4.4 阳性重组质粒的测序结果
第42-43页
1.5 讨论
第43-46页
第2章 Dybowskin-2CDYa融合蛋白的原核表达系统的构建和活性研究
第46-62页
2.1 引言
第46页
2.2 实验材料
第46-50页
2.2.1 菌株、质粒
第46页
2.2.2 实验试剂
第46页
2.2.3 主要仪器
第46-47页
2.2.4 溶液与培养基的配制
第47-50页
2.3 实验方法
第50-54页
2.3.1 重组质粒的制备
第50页
2.3.2 重组质粒的转化
第50页
2.3.3 转化菌株的PCR鉴定
第50-51页
2.3.4 阳性重组了的摇瓶诱导
第51页
2.3.5 诱导产物的SDS-PAGE分析
第51-52页
2.3.6 表达产物的Western Blot鉴定
第52页
2.3.7 融合蛋白的分离纯化
第52-53页
2.3.7.1 包涵体的破碎与融合蛋白的表达分析
第52页
2.3.7.2 包涵体的洗涤和溶解
第52-53页
2.3.7.3 镍离子亲和层析分离纯化
第53页
2.3.8 纯化蛋白的复性和活性检测
第53-54页
2.3.8.1 纯化蛋白的透析
第53页
2.3.8.2 纯化产物的活性检测
第53-54页
2.4 结果
第54-60页
2.4.1 重组质粒的制备
第54-55页
2.4.2 重组质粒转化BL21的PCR验证
第55-56页
2.4.3 诱导产物的SDS-PAGE分析
第56页
2.4.4 表达产物的Western Blot
第56-57页
2.4.5 融合蛋白的表达方式
第57页
2.4.6 纯化产物的SDS-PAGE分析
第57-58页
2.4.7 纯化产物的活性检测
第58-60页
2.5 讨论
第60-62页
第3章 结论
第62-63页
致谢
第63-64页
参考文献
第64-68页
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况
第68页
本篇论文共
68
页,
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。
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