论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 维生素D受体 | 第13-21页 |
| 1.1.1 VDR结构及功能 | 第13-15页 |
| 1.1.2 VDR基因组及非基因组效应 | 第15-17页 |
| 1.1.3 VDR相互作用蛋白因子效应 | 第17-18页 |
| 1.1.4 VDR的生理学功能及相关疾病 | 第18-21页 |
| 1.2 转录组分析研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 研究的目的意义 | 第22-24页 |
| 第2章 VDR及相关基因在VDR敲除鼠不同组织的表达分析 | 第24-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.4 实验引物 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 敲除鼠表型观察 | 第25页 |
| 2.2.2 VDR及相关基因表达鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.3 蛋白水平检测敲除鼠VDR表达 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 敲除鼠表型分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 WesternBlot检测VDR在不同组织的表达差异 | 第28页 |
| 2.3.3 VDR敲除鼠VDR基因表达分析 | 第28-29页 |
| 2.3.4 VDR敲除鼠中维生素D代谢相关基因表达水平检测 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第3章 VDR敲除鼠睾丸组织转录组测序分析 | 第32-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第32页 |
| 3.1.4 实验引物 | 第32-33页 |
| 3.2 实验步骤 | 第33-35页 |
| 3.2.1 小鼠睾丸组织总RNA提取 | 第33页 |
| 3.2.2 小鼠睾丸组织转录组测序 | 第33-34页 |
| 3.2.3 基因表达谱分析 | 第34-35页 |
| 3.2.4 实时荧光PCR验证基因表达水平 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-44页 |
| 3.3.1 测序质量评估 | 第35-36页 |
| 3.3.2 基因组组装及注解 | 第36-37页 |
| 3.3.3 差异表达基因筛选 | 第37-41页 |
| 3.3.4 GO富集分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5 KEGG功能富集分析 | 第42-43页 |
| 3.3.6 实时荧光定量PCR验证差异表达基因 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-48页 |
| 第4章 酵母双杂交筛选VDR互作蛋白 | 第48-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 实验动物、菌株及质粒 | 第48页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.3 实验引物 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-55页 |
| 4.2.1 VDR诱饵表达载体(pGBKT7-VDR)的构建与鉴定 | 第49-52页 |
| 4.2.2 WesternBlot检测VDR基因在酿酒酵母AH109中表达 | 第52-53页 |
| 4.2.3 重组表达载体pGBKT7-VDR表达VDR诱饵蛋白自激活检测 | 第53页 |
| 4.2.4 删除转录激活域后VDR诱饵表达载体构建与鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.5 VDR互作蛋白筛选 | 第54页 |
| 4.2.6 β-阳性克隆测定 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-63页 |
| 4.3.1 VDR诱饵表达载体(pGBKT7-VDR)的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.2 VDR诱饵蛋白表达检测 | 第56-57页 |
| 4.3.3 VDR诱饵蛋白自激活验证 | 第57页 |
| 4.3.4 删除转录激活域后VDR诱饵表达载体的构建及自激活验证 | 第57-59页 |
| 4.3.5 酵母双杂交效率验证及阳性克隆筛选 | 第59-60页 |
| 4.3.6 VDR互作蛋白鉴定 | 第60-62页 |
| 4.3.7 阳性克隆鉴定 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
