论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| 1. 文献综述 | 第9-24页 |
| 1.1 基因组编辑的方法 | 第9-19页 |
| 1.1.1 基因组编辑技术的出现 | 第9-10页 |
| 1.1.2 基因组编辑的重要性 | 第10-13页 |
| 1.1.2.1 基因编辑技术在基因治疗领域的应用 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 基因编辑技术在动物遗传改良中的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 基因编辑技术在植物中的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.3 基因组编辑技术的种类 | 第13-19页 |
| 1.1.3.1 锌指核酸酶(ZFNs) | 第13-14页 |
| 1.1.3.2 转录激活因子样效应物(TALEs) | 第14-16页 |
| 1.1.3.3 归巢核酸内切酶技术 | 第16页 |
| 1.1.3.4 规律成簇间隔短回文重复CRISPR/Cas9 | 第16-19页 |
| 1.2 CRISPR-Cas9在动植物中的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas9技术在小鼠、斑马鱼、人类细胞中的发展应用 | 第19-20页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9技术在拟南芥、水稻及其他农作物中的发展应用 | 第20-22页 |
| 1.3 eIF2α的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.1 eIF2α激酶及其种类 | 第22-23页 |
| 1.3.2 eIF2α激酶的下游信号 | 第23-24页 |
| 2 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-39页 |
| 3.1 试验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 3.1.2 仪器 | 第25-26页 |
| 3.1.3 菌类材料及载体 | 第26页 |
| 3.1.4 所用酶及试剂 | 第26页 |
| 3.1.5 常用培养基及溶液 | 第26-27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-39页 |
| 3.2.1 拟南芥eIF2α CRISPR/Cas9载体构建方法 | 第27-35页 |
| 3.2.1.1 引物复性 | 第27页 |
| 3.2.1.2 CRISPR/Cas9载体BbsI酶切 | 第27-28页 |
| 3.2.1.3 酶切产物纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.1.4 gRNA与CRISPR/Cas9载体连接 | 第29页 |
| 3.2.1.5 连接产物转化入DH5α | 第29-30页 |
| 3.2.1.6 菌落PCR检测 | 第30页 |
| 3.2.1.7 质粒DNA提取 | 第30-32页 |
| 3.2.1.8 质粒PCR检测 | 第32页 |
| 3.2.1.9 gRNA-Cas9与1300载体连接 | 第32-34页 |
| 3.2.1.10 gRNA-Cas9与1300连接产物转入农杆菌感受态 | 第34页 |
| 3.2.1.11 农杆菌侵染拟南芥花序 | 第34-35页 |
| 3.2.2 玉米HLH、BRD基因CRISPR/Cas9载体构建方法 | 第35-37页 |
| 3.2.2.1 启动子和终止子的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.2.2 gRNA与Zm-CRISPR/Cas9载体连接 | 第36-37页 |
| 3.2.2.3 Zm-gRNA-Cas9与1300载体连接 | 第37页 |
| 3.2.2.4 玉米转化 | 第37页 |
| 3.2.3 拟南芥突变体筛选 | 第37-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-47页 |
| 4.1 拟南芥CRISPR/Cas9介导eIF2α敲除 | 第39-43页 |
| 4.1.1 gRNA与Cas9的融合 | 第39-41页 |
| 4.1.2 gdRNA-Cas9与1300载体的连接 | 第41页 |
| 4.1.3 转化植株的筛选结果 | 第41页 |
| 4.1.4 突变体植株的分子鉴定 | 第41-43页 |
| 4.2 玉米CRISPR/Cas9载体的优化及构建 | 第43-47页 |
| 4.2.1 OCS终止子、35S启动子的优化 | 第44-45页 |
| 4.2.2 ZmU3启动子、OsUBQ启动子的优化 | 第45-46页 |
| 4.2.3 gRNA与Cas9的融合 | 第46页 |
| 4.2.4 gRNA-Cas9与1300载体的连接 | 第46-47页 |
| 5 结论与讨论 | 第47-51页 |
| 5.1 结论 | 第47-48页 |
| 5.1.1 拟南芥CRISPR/Cas9载体的构建及突变植株的获得 | 第47页 |
| 5.1.2 玉米CRISPR/Cas9载体的优化 | 第47-48页 |
| 5.2 讨论 | 第48-51页 |
| 5.2.1 构建多基因识别位点的CRISPR/Cas9表达载体 | 第48-49页 |
| 5.2.2 本研究存在的问题 | 第49-50页 |
| 5.2.3 进一步研究计划 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
