论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| 1.1 DEAD-box RNA解旋酶简介 | 第10-14页 |
| 1.1.1 DEAD-box RNA解旋酶结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 DEAD-box RNA解旋酶的功能 | 第12-14页 |
| 1.2 DDX3X蛋白质简介 | 第14-16页 |
| 1.2.1 DDX3X的主要功能 | 第15-16页 |
| 1.3 MicroRNA简介 | 第16-19页 |
| 1.3.1 microRNA的发现 | 第17页 |
| 1.3.2 microRNA的形成过程 | 第17-19页 |
| 1.4 RNA甲基化修饰 | 第19-21页 |
| 1.5 染色体阻滞 | 第21-22页 |
| 1.6 CRISPR系统 | 第22-28页 |
| 1.6.1 CRISPR系统的发现 | 第23-24页 |
| 1.6.2 CRISPR系统与免疫防御机制 | 第24页 |
| 1.6.3 CRISPR/cas-9系统作为一种新型的基因编辑技术 | 第24-26页 |
| 1.6.4 CRISPR/cas-9系统的脱靶效应 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 实验耗材和仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.1.2 实验试剂及配制 | 第29-30页 |
| 2.1.3 生物材料 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-44页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第30-31页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第31页 |
| 2.2.3 细胞的冻存 | 第31页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第31-32页 |
| 2.2.5 总RNA的抽提 | 第32页 |
| 2.2.6 DNase消化 | 第32-34页 |
| 2.2.7 cDNA反转录 | 第34页 |
| 2.2.8 Real time PCR | 第34-35页 |
| 2.2.9 免疫共沉淀 | 第35-36页 |
| 2.2.10 Western blot | 第36-37页 |
| 2.2.11 luciferase assay | 第37页 |
| 2.2.12 后期相细胞的制片 | 第37页 |
| 2.2.13 中期相细胞的制片 | 第37-38页 |
| 2.2.14 染色体的抽提 | 第38页 |
| 2.2.15 免疫荧光 | 第38页 |
| 2.2.16 质粒构建 | 第38-41页 |
| 2.2.17 sgRNA效率检测即surveyor assay | 第41-42页 |
| 2.2.18 细胞系构建 | 第42-44页 |
| 第三章 实验结果 | 第44-60页 |
| 3.1 DDX3X与Ago2免疫共沉淀实验 | 第44页 |
| 3.2 microRNA的深度测序 | 第44-48页 |
| 3.3 在碱基修饰的情况下,mir-1271与mir-331对target的基因的调控 | 第48-49页 |
| 3.4 DDX3X对有丝分裂后期染色体分离的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 DDX3X对有丝分裂中期染色体的影响 | 第50-51页 |
| 3.6 在细胞有丝分裂过程中DDX3X的表达情况 | 第51-52页 |
| 3.7 着丝粒蛋白与染色体分离 | 第52-53页 |
| 3.8 DDX3X对着丝粒蛋白的影响 | 第53-55页 |
| 3.9 CRISPR/cas-9技术建立knockout的稳定细胞系 | 第55-60页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 DDX3X在microRNA通路中的作用 | 第60-61页 |
| 4.2 染色体分离调控机制的初步探索 | 第61-62页 |
| 4.3 CRISPR/cas-9技术建立knockout的稳定细胞系 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录Ⅰ | 第68-70页 |
| 附录Ⅱ | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
