论文目录 | |
| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| 1.1 转基因技术的发展现状 | 第9页 |
| 1.2 转基因技术存在的问题 | 第9-10页 |
| 1.3 调控元件UCOE | 第10-12页 |
| 1.3.1 调控元件UCOE的结构组成及功能介绍 | 第10-11页 |
| 1.3.2 调控元件UCOE的临床应用 | 第11-12页 |
| 1.4 核基质/核骨架附着区(S/MARs序列) | 第12页 |
| 1.4.1 核基质/核骨架附着区(S/MARs序列)结构特点 | 第12页 |
| 1.4.2 核基质/核骨架附着区(S/MARs序列)增强转基因表达的作用机制 | 第12页 |
| 1.5 新型载体Minicircle | 第12-13页 |
| 1.6 展望 | 第13-14页 |
| 2 引言 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-32页 |
| 3.1 材料 | 第15页 |
| 3.1.1 样品采集 | 第15页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第15页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第15页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第15页 |
| 3.2 试验方法 | 第15-32页 |
| 3.2.1 人UCOE片段的克隆及重组质粒构建 | 第15-17页 |
| 3.2.1.1 人全血基因组DNA的提取 | 第15页 |
| 3.2.1.2 引物设计与合成 | 第15-16页 |
| 3.2.1.3 目的片段hUCOE的扩增 | 第16页 |
| 3.2.1.4 pMD19-T-hUCOE质粒的构建与鉴定 | 第16-17页 |
| 3.2.1.5 GFP2-hUCOE质粒的构建与鉴定 | 第17页 |
| 3.2.2 猪不同UCOE片段的克隆及重组质粒构建 | 第17-26页 |
| 3.2.2.1 猪基因组DNA的提取 | 第17-18页 |
| 3.2.2.2 引物设计与合成 | 第18-19页 |
| 3.2.2.3 pGEM-T-sUCOE质粒的构建 | 第19-20页 |
| 3.2.2.4 构建包含不同sUCOE片段的重组质粒 | 第20-26页 |
| 3.2.3 最佳sUCOE片段的筛选 | 第26-29页 |
| 3.2.3.1 细胞培养及转染 | 第26-27页 |
| 3.2.3.2 实时荧光定量检测报告基因GFP的mRNA相对表达水平 | 第27-28页 |
| 3.2.3.3 Western blot法检测报告基因GFP的相对表达量 | 第28-29页 |
| 3.2.3.4 绿色荧光持续观察 | 第29页 |
| 3.2.4 最佳sUCOE片段的功能评价 | 第29-32页 |
| 3.2.4.1 微环附着质粒pCpG-Mini-GFP的构建及诱导 | 第29-30页 |
| 3.2.4.2 pCpG-Mini-GFP-UCOE质粒的构建及诱导 | 第30-31页 |
| 3.2.4.3 实时荧光定量检测报告基因GFP的mRNA相对表达水平 | 第31页 |
| 3.2.4.4 Western blot法检测报告基因GFP的相对表达量 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-46页 |
| 4.1 目的片段hUCOE的克隆及重组质粒构建 | 第32-33页 |
| 4.1.1 目的片段hUCOE的克隆及pMD19-T-hUCOE质粒的构建 | 第32页 |
| 4.1.2 GFP2-hUCOE质粒的构建 | 第32-33页 |
| 4.2 目的片段sUCOE的克隆及重组质粒构建 | 第33-40页 |
| 4.2.1 目的片段sUCOE的克隆及pGEM-T-sUCOE质粒的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.2 构建包含不同sUCOE片段的重组质粒 | 第34-40页 |
| 4.3 最佳sUCOE片段的筛选 | 第40-42页 |
| 4.3.1 实时荧光定量检测报告基因GFP的mRNA相对表达水平 | 第40-41页 |
| 4.3.2 Western blot法检测报告基因GFP的相对表达量 | 第41页 |
| 4.3.3 绿色荧光持续观察 | 第41-42页 |
| 4.4 最佳sUCOE片段的功能评价 | 第42-46页 |
| 4.4.1 质粒pCpG-Mini-GFP的构建 | 第42-43页 |
| 4.4.1.1 质粒pCpG-GFP的构建 | 第42页 |
| 4.4.1.2 质粒pCpG-Mini-GFP的构建 | 第42-43页 |
| 4.4.2 质粒pCpG-Mini-GFP-UCOE的构建 | 第43页 |
| 4.4.3 质粒pCpG-Mini-GFP及pCpG-Mini-GFP-UCOE的诱导 | 第43-44页 |
| 4.4.4 实时荧光定量检测报告基因GFP的mRNA相对表达水平 | 第44页 |
| 4.4.5 Western blot法检测报告基因GFP的相对表达量 | 第44-46页 |
| 5 讨论与结论 | 第46-48页 |
| 5.1 讨论 | 第46-47页 |
| 5.2 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 英文摘要 | 第53页 |
