论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-8页 |
| 第一部分 人类akirin基因的功能研究 | 第8-45页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-15页 |
| 1.1 转录因子NF-κB及其信号通路 | 第11-12页 |
| 1.2 Akirin基因参与NF-κB信号通路研究概述 | 第12页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第12-15页 |
| 第2章 材料与方法 | 第15-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和细胞系 | 第15页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第16-19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 生物信息学分析方法 | 第19页 |
| 2.2.2 统计学分析方法 | 第19-20页 |
| 2.2.3 分子克隆相关方法 | 第20-23页 |
| 2.2.4 细胞相关实验方法及重组蛋白检测方法 | 第23-29页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第29-39页 |
| 3.1 人类akirin2基因的克隆及基因功能研究 | 第29-36页 |
| 3.1.1 人类akirin2基因的克隆 | 第29-30页 |
| 3.1.2 Human akirin2的序列比对和进化分析 | 第30-32页 |
| 3.1.3 Human akirin2的亚细胞定位 | 第32-34页 |
| 3.1.4 过表达Human akirin2可以激活NF-κB的表达 | 第34-36页 |
| 3.2 Akirin和14-3-3的相互作用 | 第36-39页 |
| 3.2.1 Human akirin2和human 14-3-3β的体内结合实验 | 第37-38页 |
| 3.2.2 Human akirin2和human 14-3-3β的亚细胞定位 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-41页 |
| 总结与展望 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第二部分 利用CRISPR-CAS9系统进行斑马鱼性腺成熟相关基因的突变诱导与筛选 | 第45-87页 |
| 摘要 | 第45-47页 |
| ABSTRACT | 第47-49页 |
| 第1章 前言 | 第49-57页 |
| 1.1 斑马鱼性腺成熟相关基因背景介绍 | 第49-50页 |
| 1.1.1 EAP1基因介绍 | 第49页 |
| 1.1.2 哺乳动物附睾特异表达基因概述 | 第49-50页 |
| 1.2 CRISPR-CAS9系统在斑马鱼基因编辑中的应用进展简介 | 第50-54页 |
| 1.3 CRISPR-CAS9系统在斑马鱼基因组中可实现大片段删除 | 第54-55页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第55-57页 |
| 第2章 材料与方法 | 第57-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 2.1.1 实验动物斑马鱼及饲养条件 | 第57页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第57页 |
| 2.1.3 试剂与耗材 | 第57页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第57页 |
| 2.1.5 试剂配制 | 第57-58页 |
| 2.1.6 引物 | 第58页 |
| 2.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 2.2.1 靶位点的选择及嵌套引物的设计 | 第58页 |
| 2.2.2 分子生物学检测相关方法 | 第58-59页 |
| 2.2.3 sgRNA体外转录载体构建 | 第59页 |
| 2.2.4 sgRNA及Cas9mRNA制备相关实验方法 | 第59-61页 |
| 2.2.5 显微注射相关方法 | 第61-63页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第63-78页 |
| 3.1 斑马鱼EAP1基因序列分析 | 第63-66页 |
| 3.2 靶位点确定 | 第66-67页 |
| 3.3 sgRNA体外转录载体构建 | 第67-68页 |
| 3.3.1 单克隆PCR | 第67页 |
| 3.3.2 Sanger测序 | 第67-68页 |
| 3.4 CAS9 mRNA和sgRNA体外转录 | 第68页 |
| 3.5 靶位点有效性检测 | 第68-69页 |
| 3.6 显微注射sgRNA注射量摸索 | 第69-70页 |
| 3.7 F0突变效率检测 | 第70-72页 |
| 3.7.1 F0胚胎基因组PCR检测 | 第71页 |
| 3.7.2 F0尾鳍突变效率检测 | 第71-72页 |
| 3.8 筛选突变可遗传的F0成鱼 | 第72-73页 |
| 3.9 F0突变传代效率检测 | 第73-74页 |
| 3.10 F1突变类型检测 | 第74-75页 |
| 3.11 其它斑马鱼性成熟相关基因缺失突变体诱导与筛选情况汇总 | 第75-78页 |
| 讨论 | 第78-79页 |
| 总结与展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 第三部分 核酸酶I-SceI介导的过表达EAP1转基因斑马鱼构建 | 第87-105页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| ABSTRACT | 第88-89页 |
| 第1章 前言 | 第89-91页 |
| 1.1 EAP1基因介绍 | 第89页 |
| 1.2 核酸酶I-SceI介导的斑马鱼转基因方法简介 | 第89-90页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第90-91页 |
| 第2章 材料与方法 | 第91-94页 |
| 2.1 实验材料 | 第91页 |
| 2.1.1 试剂 | 第91页 |
| 2.1.2 引物 | 第91页 |
| 2.2 实验方法 | 第91-94页 |
| 2.2.1 CMV-zebrafish EAP1-EGFP重组载体构建: | 第91页 |
| 2.2.2 I-SceI-CMV-zebrafish EAP1-EGFP-I-SceI重组载体构建 | 第91-93页 |
| 2.2.3 显微注射 | 第93-94页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第94-99页 |
| 3.1 基因序列分析 | 第94页 |
| 3.2 斑马鱼EAP1基因克隆 | 第94页 |
| 3.3 Zebrafish EAP1-pEGFP-N1表达载体构建 | 第94-95页 |
| 3.4 I-SceI-zebrafish EAP1-EGFP-I-SceI-pGM-T转基因载体构建 | 第95-97页 |
| 3.5 转基因载体有效性检测 | 第97-99页 |
| 讨论 | 第99-100页 |
| 总结与展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 附录 | 第105-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第113-114页 |
| 附件 | 第114页 |
