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拟南芥候选磷调控转录因子基因功能分析
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拟南芥候选磷调控转录因子基因功能分析
论文目录
致谢
第1-9页
摘要
第9-10页
第一章 文献综述
第10-21页
1.1 植物中磷的重要性以及通过生物学方法提高磷效率意义
第10页
1.2 拟南芥低磷胁迫下的适应性机制
第10-12页
1.2.1 根系形态的变化
第10-11页
1.2.2 根系分泌物的适应性变化
第11-12页
1.2.3 植物体内磷的转移和利用
第12页
1.3 植物的磷代谢网络
第12-13页
1.3.1 低磷胁迫下的脂类代谢
第12页
1.3.2 低磷胁迫下的旁路代谢
第12-13页
1.4 植物中磷响应信号的感知及传递通路
第13-15页
1.4.1 植物中的磷信号感知系统
第13-14页
1.4.2 植物中的磷信号传递系统
第14-15页
1.5 转录因子对拟南芥低磷胁迫的调控
第15-17页
1.5.1 转录因子及其功能
第15-16页
1.5.2 转录因子功能研究的方法
第16-17页
1.6 拟南芥低磷胁迫转录因子研究进展
第17-19页
1.6.1 拟南芥转录因子分类
第17页
1.6.2 植物磷调控转录因子研究进展
第17-19页
1.7 本文研究目的意义
第19-20页
1.8 研究内容和技术路线
第20-21页
第二章 候选磷调控转录因子的表达分析
第21-30页
2.1 材料、试剂和仪器
第21-22页
2.1.1 实验材料
第21页
2.1.2 仪器与试剂
第21-22页
2.2 实验方法
第22-27页
2.2.1 实验准备
第22-23页
2.2.2 拟南芥的消毒及水培方法
第23页
2.2.3 拟南芥RNA提取
第23-24页
2.2.4 拟南芥RNA样品的纯化
第24-25页
2.2.5 反转录cDNA第一链
第25页
2.2.6 低磷响应基因在全磷和缺磷培养条件下的表达分析
第25-27页
2.3 结果与分析
第27-29页
2.3.1 拟南芥RNA的提取
第27页
2.3.2 反转录cDNA的检测
第27-28页
2.3.3 目的基因缺磷处理下的表达分析
第28-29页
2.4 小结
第29-30页
第三章 候选基因过量表达拟南芥植株的获得
第30-40页
3.1 材料与试剂
第30页
3.1.1 试剂
第30页
3.1.2 载体
第30页
3.1.3 材料
第30页
3.2 方法
第30-34页
3.2.1 拟南芥总RNA的提取及cDNA的合成
第30页
3.2.2 全长克隆
第30-31页
3.2.3 目的基因的回收和纯化
第31-32页
3.2.4 目的基因与pMD-18T载体连接
第32页
3.2.5 感受态细胞的制备及转化
第32页
3.2.6 连接产物的转化与鉴定
第32-33页
3.2.7 阳性克隆的菌落PCR鉴定体系:
第33页
3.2.8 质粒提取
第33-34页
3.2.9 质粒PCR鉴定
第34页
3.2.10 质粒提取及重组质粒鉴定
第34页
3.3 农杆菌侵染法转化拟南芥
第34-35页
3.3.1 农杆菌感受态细胞的制备
第34-35页
3.3.2 重组载体转入农杆菌及阳性克隆鉴定
第35页
3.3.3 农杆菌侵染拟南芥
第35页
3.4 转基因株系的检测
第35-36页
3.4.1 拟南芥基因组DNA提取
第35页
3.4.2 过表达转基因拟南芥的检测
第35-36页
3.5 结果
第36-39页
3.5.1 植物过表达载体的构建及转化农杆菌
第36-37页
3.5.2 过表达植株的筛选与鉴定
第37-39页
3.6 结论
第39-40页
第四章 候选基因突变体的分析
第40-51页
4.1 材料与试剂
第40页
4.1.1 实验材料
第40页
4.1.2 实验试剂
第40页
4.2 实验方法
第40-42页
4.2.1 拟南芥种子消毒方法
第40页
4.2.2 拟南芥水培方法
第40页
4.2.3 T-DNA插入纯合体鉴定
第40-41页
4.2.4 根长的测定方法
第41页
4.2.5 根冠比测定方法
第41页
4.2.6 根际酸性磷酸酶活性的测定方法
第41-42页
4.2.7 花色素苷含量的测定方法
第42页
4.3 结果与分析
第42-47页
4.3.1 实验拟南芥的水培
第42-43页
4.3.2 转基因株系基因表达的qRT-PCR分析
第43页
4.3.3 过表达转基因株系的表型的鉴定
第43页
4.3.4 Salk突变体的纯合子鉴定结果
第43-44页
4.3.5 根长测定结果
第44-45页
4.3.6 根冠比测定结果
第45页
4.3.7 突变体与野生型拟南芥中根系酸性磷酸酶活性分析
第45-46页
4.3.8 花色素苷含量测定结果
第46-47页
4.4 小结
第47页
4.5 结论与讨论
第47-51页
第五章 转录因子的原核表达
第51-59页
5.1 材料与试剂
第51-53页
5.1.1 菌株与载体
第51页
5.1.2 酶和其它试剂
第51页
5.1.3 主要溶液的配制
第51-52页
5.1.4 PCR引物
第52页
5.1.5 原核表达产物的SDS-PAGE电泳分析
第52-53页
5.2 原核表达载体的构建
第53页
5.3 蛋白的诱导表达
第53页
5.4 蛋白表达的结果
第53-58页
5.4.1 原核表达载体的构建
第54-55页
5.4.2 原核蛋白诱导表达及可溶性鉴定
第55-58页
5.5 原核蛋白表达的分析与讨论
第58-59页
ABSTRACT
第59-61页
参考文献
第61-66页
本篇论文共
66
页,
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。
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