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油菜RBOHB基因的克隆及表达分析

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油菜RBOHB基因的克隆及表达分析
论文目录
 
摘要第11-12页
Abstract第12-14页
缩略词表第14-16页
第一章 文献综述第16-32页
  1.1 植物中的活性氧第16-20页
    1.1.1 植物中活性氧的产生机制第16-17页
    1.1.2 植物活性氧的功能第17-18页
    1.1.3 活性氧的消除途径第18-19页
    1.1.4 现存的问题第19-20页
  1.2 NADPH氧化酶的研究进展第20-29页
    1.2.1 NADPH氧化酶的组分定位第20-22页
    1.2.2 NADPH氧化酶组装活化过程及调节第22-24页
      1.2.2.1 钙信号与NADPH氧化酶活化第22-23页
      1.2.2.2 碱化作用与NADPH氧化酶活化第23页
      1.2.2.3 臭氧刺激与NADPH氧化酶活化第23页
      1.2.2.4 磷酸化与NADPH氧化酶活化第23-24页
      1.2.2.5 病毒浸染与NADPH氧化酶活化第24页
      1.2.2.6 不同诱导剂与NADPH氧化酶活化第24页
    1.2.3 胁迫条件下NADPH氧化酶生理特性变化第24-26页
      1.2.3.1 缺氧条件下NADPH氧化酶生理特性变化第25页
      1.2.3.2 盐胁迫处理下NADPH氧化酶生理特性变化第25页
      1.2.3.3 外源H_2O_2诱导的NADPH氧化酶生理特性变化第25-26页
    1.2.4 由NADPH氧化酶诱导的ROS爆发第26-29页
      1.2.4.1 活性氧在细胞内承担的第二信使第26-27页
      1.2.4.2 ROS的增加与细胞氧化还原状态的改变相关第27页
      1.2.4.3 ROS诱导的表皮细胞死亡第27页
      1.2.4.4 参与细胞周期调控第27页
      1.2.4.5 参与防御病原体第27-28页
      1.2.4.6 ROS信号与其它信号交叉第28-29页
  1.3 MAPK级联途径与NADPH氧化酶第29-30页
  1.4 本研究的目的和意义第30-32页
第二章 实验材料与方法第32-52页
  2.1 实验材料第32-34页
    2.1.1 植物材料与培养第32页
    2.1.2 材料处理第32页
    2.1.3 菌株与载体第32页
    2.1.4 PCR引物第32-33页
    2.1.5 试剂第33页
    2.1.6 仪器第33-34页
  2.2 实验方法第34-52页
    2.2.1 油菜RBOHB基因编码区的克隆与测序第34-39页
      2.2.1.1 油菜叶片总RNA的提取第34-35页
      2.2.1.2 反转录cDNA第一链的合成第35-36页
      2.2.1.3 简并引物的设计第36-37页
      2.2.1.4 PCR扩增第37页
      2.2.1.5 目的基因片段的回收第37页
      2.2.1.6 连接反应第37-38页
      2.2.1.7 大肠杆菌感受态细胞的转化第38页
      2.2.1.8 平板筛选第38页
      2.2.1.9 阳性菌的PCR鉴定及克隆基因的测序第38-39页
    2.2.2 RACE方法克隆RBOHB基因全长第39-45页
      2.2.2.1 3’RACE扩增油菜RBOHB基因的 3’末端第39-42页
      2.2.2.2 5’RACE扩增RBOHB基因的 5’末端第42-45页
    2.2.3 油菜RBOHB基因的生物信息学分析第45页
    2.2.4 油菜RBOHB基因组织特异性表达检测第45页
    2.2.5 逆境胁迫对油菜RBOHB基因转录水平的影响第45-46页
    2.2.6 外源H_2O_2胁迫对两种油菜生理指标的影响第46-51页
      2.2.6.1 实验材料与H_2O_2胁迫处理第46-47页
      2.2.6.2 各项生理指标的测定方法第47-51页
    2.2.7 H_2O_2胁迫及MAPKK抑制剂预处理对两种油菜NADPH氧化酶活性的影响第51页
      2.2.7.1 实验材料与处理第51页
      2.2.7.2 测定方法第51页
    2.2.8 数据分析第51-52页
第三章 结果与分析第52-81页
  3.1 油菜RBOHB基因的克隆第52-56页
    3.1.1 油菜总RNA提取第52页
    3.1.2 油菜RBOHB基因编码区的克隆第52-54页
    3.1.3 RACE方法克隆油菜RBOHB基因全长第54-56页
      3.1.3.1 3’RACE扩增油菜RBOHB基因的 3’末端第54-55页
      3.1.3.2 5’RACE扩增油菜RBOHB基因的 5’末端第55-56页
      3.1.3.3 油菜RBOHB基因全长的获得第56页
  3.2 油菜RBOHB基因序列的生物信息学分析第56-66页
    3.2.1 油菜RBOHB的序列分析第56-58页
    3.2.2 油菜RBOHB与部分植物的氨基酸序列比对及系统进化树分析第58-60页
    3.2.3 油菜RBOHB预测蛋白基本特征分析及氨基酸组成第60-62页
    3.2.4 油菜RBOHB预测蛋白质疏水性/亲水性与跨膜结构域分析第62-64页
    3.2.5 油菜RBOHB蛋白二级结构的预测第64-65页
    3.2.6 油菜RBOHB蛋白质三级结构的预测第65-66页
  3.3 油菜RBOHB基因组织特异性表达检测第66-67页
  3.4 逆境胁迫下油菜RBOHB基因在转录水平上的表达分析第67-73页
    3.4.1 不同逆境胁迫处理对RBOHB基因转录水平的影响第67-70页
    3.4.2 逆境胁迫及MAPKK抑制剂预处理对油菜RBOHB基因转录水平的影响第70-73页
  3.5 外源H_2O_2胁迫对两种油菜相关生理指标的影响第73-79页
    3.5.1 H_2O_2胁迫对两种油菜抗氧化酶活性影响的分析第73-75页
    3.5.2 H_2O_2胁迫下两种油菜叶片叶绿素含量的变化第75-76页
    3.5.3 H_2O_2胁迫下两种油菜叶片MDA含量的变化第76-77页
    3.5.4 H_2O_2胁迫下两种油菜叶片游离脯氨酸含量的变化第77-78页
    3.5.5 H_2O_2胁迫下两种油菜叶片中NADPH氧化酶活性的变化第78-79页
  3.6 H_2O_2胁迫及MAPKK抑制剂预处理对两种油菜NADPH氧化酶活性的影响第79-81页
第四章 讨论第81-85页
  4.1 油菜RBOHB基因的克隆第81页
  4.2 油菜RBOHB基因的生物信息学分析第81-82页
  4.3 逆境胁迫对油菜RBOHB基因转录水平的影响第82页
  4.4 外源H_2O_2胁迫对两种油菜相关生理指标的影响第82-83页
  4.5 MAPK级联途径与油菜RBOHB基因第83-85页
第五章 结论第85-87页
参考文献第87-95页
致谢第95页

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