论文目录 | |
中文摘要 | 第1-4页 |
英文摘要 | 第4-5页 |
中英文对照及英文缩写词表 | 第5-9页 |
1 引言 | 第9-19页 |
1.1 GA研究进展 | 第9-11页 |
1.1.1 GA的分类、结构及分布 | 第9页 |
1.1.2 GA的功能 | 第9-10页 |
1.1.3 GA活性的调节 | 第10-11页 |
1.2 GRAS蛋白家族研究进展 | 第11-14页 |
1.2.1 GRAS蛋白的结构及分类 | 第11-13页 |
1.2.2 GRAS蛋白与GA信号 | 第13-14页 |
1.2.3 GRAS蛋白与O-GlcNAc糖基化修饰 | 第14页 |
1.3 拟南芥O-GlcNAc糖基转移酶 | 第14-16页 |
1.3.1 SPY和SEC的结构 | 第15-16页 |
1.3.2 SPY/SEC与GA信号之间的联系 | 第16页 |
1.4 立题依据 | 第16-19页 |
2 材料与方法 | 第19-33页 |
2.1 主要实验材料与试剂 | 第19-21页 |
2.1.1 实验材料 | 第19-21页 |
2.1.2 抗体及试剂 | 第21页 |
2.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
2.3 实验方法 | 第22-33页 |
2.3.1 总RNA提取 | 第22页 |
2.3.2 逆转录 | 第22-23页 |
2.3.3 PCR反应 | 第23-25页 |
2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
2.3.5 胶回收 | 第26页 |
2.3.6 双酶切 | 第26页 |
2.3.7 质粒的连接 | 第26-27页 |
2.3.8 质粒的转化 | 第27页 |
2.3.9 挑菌、摇菌 | 第27页 |
2.3.10 小提质粒 | 第27-28页 |
2.3.11 蛋白预表达实验 | 第28页 |
2.3.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第28-29页 |
2.3.13 考马斯亮蓝R250染色 | 第29页 |
2.3.14 Western Blot | 第29页 |
2.3.15 大量分离纯化蛋白 | 第29-31页 |
2.3.16 体外酶活性实验 | 第31页 |
2.3.17 薄层层析 | 第31-32页 |
2.3.18 粗提拟南芥DNA | 第32页 |
2.3.19 植物材料的培养 | 第32-33页 |
3 实验结果 | 第33-48页 |
3.1 SCL31原核表达体系的构建和蛋白纯化 | 第33-40页 |
3.1.1 从拟南芥花序组织中扩增得到scl31基因 | 第33-34页 |
3.1.2 pMD18-T-SCL31克隆载体的构建及鉴定 | 第34-35页 |
3.1.3 pGEX-6p1SCL31表达载体的构建及鉴定 | 第35-37页 |
3.1.4 SCL31蛋白的表达和纯化 | 第37-40页 |
3.2 SCL31蛋白甲基转移酶活性检测 | 第40-41页 |
3.2.1 放射性薄层层析检测SCL31蛋白甲基转移酶活性 | 第40-41页 |
3.2.2 薄层层析检测SCL31蛋白甲基转移酶活性 | 第41页 |
3.3 scl31纯合突变体下胚轴明显增长 | 第41-45页 |
3.3.1 scl31纯合突变体DNA水平鉴定实验 | 第42-43页 |
3.3.2 scl31纯合突变体mRNA水平鉴定实验 | 第43-44页 |
3.3.3 scl31纯合突变体表型观察 | 第44-45页 |
3.4 SCL31蛋白不能发生O-GlcNAc糖基化修饰 | 第45-48页 |
3.4.1 SCL31蛋白不能被SEC所修饰 | 第46-47页 |
3.4.2 SCL31蛋白不能被SPY所修饰 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-49页 |
5 展望 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
致谢 | 第55页 |