论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 根瘤菌及根瘤菌-豆科植物共生体系的研究意义 | 第9-10页 |
| 1.2 TetR家族介绍 | 第10-11页 |
| 1.3 大豆慢生型根瘤菌中TetR家族研究进展 | 第11页 |
| 1.4 多重耐药外排泵的介绍 | 第11-12页 |
| 1.5 根瘤菌吸附能力的研究 | 第12-13页 |
| 1.6 基因功能研究思路 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-36页 |
| 2.1 实验仪器、药品和培养基组成 | 第15页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第15页 |
| 2.1.2 主要药品 | 第15页 |
| 2.1.3 培养基的制备 | 第15页 |
| 2.2 实验菌株、质粒及引物 | 第15-17页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第15-17页 |
| 2.2.2 设计引物原则 | 第17页 |
| 2.3 各种PCR | 第17-19页 |
| 2.3.1 目标基因的PCR扩增 | 第17-18页 |
| 2.3.2 bll7022与blr7023基因间序列的PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.3.3 重组表达质粒上插入目的基因片段PCR扩增 | 第19页 |
| 2.4 重组质粒构建 | 第19-24页 |
| 2.4.1 感受态细胞制备 | 第19-20页 |
| 2.4.2 目的基因的克隆 | 第20-24页 |
| 2.5 目标基因blr7023体外蛋白质表达 | 第24-30页 |
| 2.5.1 目标基因体外诱导条件探索 | 第24-27页 |
| 2.5.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第27-29页 |
| 2.5.3 谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白 | 第29-30页 |
| 2.6 电泳迁移率实验（EMSA）实验流程 | 第30-33页 |
| 2.6.1 目标蛋白与预测回文序列的反应 | 第31-33页 |
| 2.6.2 目标蛋白与碱基替换后的回文序列的反应 | 第33页 |
| 2.7 吸附实验 | 第33-35页 |
| 2.8 抑菌片实验 | 第35页 |
| 2.9 菌体对四环素的抗性实验 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-55页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第36-40页 |
| 3.1.1 目标基因blr7023在染色体上的位置 | 第36页 |
| 3.1.2 目标基因blr7023的PCR | 第36-37页 |
| 3.1.3 载体质粒及酶切 | 第37-38页 |
| 3.1.4 重组质粒的转化及验证 | 第38-40页 |
| 3.1.5 小结 | 第40页 |
| 3.2 目标蛋白体外表达条件探索 | 第40-46页 |
| 3.2.1 不同接种量下融合蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.2 不同诱导物浓度下融合蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.3 不同诱导时间下融合蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.2.4 不同诱导温度下融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 3.2.5 不同接种瓶体积下融合蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 3.2.6 不同OD600值下融合蛋白表达情况 | 第45-46页 |
| 3.2.7 融合蛋白纯化 | 第46页 |
| 3.2.8 本章小结 | 第46页 |
| 3.3 电泳迁移率实验 | 第46-49页 |
| 3.3.1 bll7022-blr7023基因间序列PCR扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.2 目标蛋白与bll7022-blr7023基因间序列的结合反应 | 第47页 |
| 3.3.3 目标基因调控位点的预测 | 第47-48页 |
| 3.3.4 目标蛋白与回文序列的结合 | 第48页 |
| 3.3.5 目标蛋白与碱基改变后的回文序列的结合 | 第48-49页 |
| 3.3.6 本章小结 | 第49页 |
| 3.4 菌体对抗生素及其他有害物质的耐受性实验 | 第49-52页 |
| 3.4.1 菌体对庆大霉素的耐受性 | 第49-50页 |
| 3.4.2 菌体对十二烷基磺酸钠（SDS)的耐受性 | 第50页 |
| 3.4.3 菌体对头孢噻肟的耐受能力 | 第50-52页 |
| 3.5 四环素对菌体生长状况的影响 | 第52页 |
| 3.6 吸附实验 | 第52-54页 |
| 3.6.1 种植环境与吸附过程 | 第52-53页 |
| 3.6.2 不同生长时间下吸附能力的差异 | 第53页 |
| 3.6.3 相同生长时间不同吸附时间下吸附能力的差异 | 第53-54页 |
| 3.7 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
