论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-32页 |
| 1 植物根系的生长发育调控 | 第13-19页 |
| 1.1 生长素调控拟南芥侧根的生长发育 | 第14-16页 |
| 1.2 调控拟南芥根尖分生组织维持与分化的分子机制 | 第16-19页 |
| 2 拟南芥生长素信号通路 | 第19-29页 |
| 2.1 生长素信号途径的组份 | 第20-26页 |
| 2.1.1 TIR1/AFB受体家族 | 第21-22页 |
| 2.1.2 Aux/IAA家族 | 第22-24页 |
| 2.1.3 ARF转录因子家族 | 第24-26页 |
| 2.2 ARF蛋白结构及作用机制的研究进展 | 第26-29页 |
| 2.2.1 ARFs和其目标序列AuxREs | 第26-28页 |
| 2.2.2 ARFs和其共抑制因子Aux/IAAs | 第28-29页 |
| 3 ARF10和ARF16相关研究进展 | 第29-32页 |
| 3.1 ARF10和ARF16对种子萌发的调控 | 第29-30页 |
| 3.2 ARF10和ARF16对植物根系生长发育的调控 | 第30-32页 |
| 第二章 研究工作 | 第32-91页 |
| 一、材料和方法 | 第32-66页 |
| 1 实验材料及试剂 | 第32-38页 |
| 1.1 植物材料及其生长条件 | 第32页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第32页 |
| 1.3 药品及其相关配制 | 第32-38页 |
| 1.3.1 试剂 | 第32-33页 |
| 1.3.2 各类试剂和培养基的配制 | 第33-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-66页 |
| 2.1 拟南芥种子的灭菌 | 第38-39页 |
| 2.1.1 气浴灭菌 | 第38-39页 |
| 2.1.2 酒精灭菌 | 第39页 |
| 2.2 植物基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 2.3 植物RNA的提取以及反转录合成cDNA | 第39-41页 |
| 2.3.1 RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 cDNA的第一链合成(罗氏反转录试剂盒) | 第40-41页 |
| 2.4 Gateway系统构建表达载体 | 第41-46页 |
| 2.4.1 Gateway系统构建表达载体的原理 | 第41-42页 |
| 2.4.2 Q5高保真酶扩增基因的CDS序列 | 第42-43页 |
| 2.4.3 基因片段的纯化回收以及质粒的提取 | 第43页 |
| 2.4.4 基因与载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.4.5 化学法制备E.coli感受态细胞 | 第44-45页 |
| 2.4.6 热击法转化E.coli DH5a | 第45页 |
| 2.4.7 重组克隆的筛选 | 第45-46页 |
| 2.4.8 质粒酶切验证 | 第46页 |
| 2.4.9 测序并获得cDNA全长序列 | 第46页 |
| 2.5 拟南芥转化以及阳性植株的筛选 | 第46-48页 |
| 2.5.1 农杆菌感受态的制备 | 第46-47页 |
| 2.5.2 农杆菌的转化 | 第47页 |
| 2.5.3 拟南芥的转化 | 第47页 |
| 2.5.4 阳性植株的筛选 | 第47-48页 |
| 2.6 PCR法检测T-DNA突变株插入 | 第48-50页 |
| 2.6.1 原理 | 第48-49页 |
| 2.6.2 验证步骤 | 第49-50页 |
| 2.7 拟南芥根系表型观察方法 | 第50-51页 |
| 2.7.1 主根长度及侧根数目的统计 | 第50页 |
| 2.7.2 主根KI染色观察QC及干细胞 | 第50页 |
| 2.7.3 GUS染色观察 | 第50-51页 |
| 2.7.4 侧根原基数目的统计 | 第51页 |
| 2.8 酵母双杂交实验 | 第51-58页 |
| 2.8.1 酵母双杂交技术原理 | 第51-53页 |
| 2.8.2 酵母感受态的制备以及快速转化法 | 第53-54页 |
| 2.8.3 钓饵蛋白自身激活报告基因的活性检测 | 第54-55页 |
| 2.8.4 文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母 | 第55-56页 |
| 2.8.5 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第56-57页 |
| 2.8.6 阳性克隆酵母的质粒的提取 | 第57页 |
| 2.8.7 阳性克隆酵母质粒转化大肠杆菌DH5a并送测序 | 第57页 |
| 2.8.8 得到测序结果并克隆目标基因的全长序列 | 第57-58页 |
| 2.8.9 载体互换验证 | 第58页 |
| 2.9 双分子荧光互补实验 | 第58-60页 |
| 2.9.1 实验原理 | 第58-59页 |
| 2.9.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.10 染色质免疫沉淀实验 | 第60-66页 |
| 2.10.1 实验原理 | 第60-61页 |
| 2.10.2 实验方法 | 第61-64页 |
| 2.10.3 检测方法-Real time-PCR扩增 | 第64-66页 |
| 二、实验结果和分析 | 第66-91页 |
| 1 ARF10和ARF16基因对根系发育的调控 | 第66-71页 |
| 1.1 arf10,arf16和arf10/16双突变体的获得以及表型分析 | 第66-67页 |
| 1.1.1 arf10/16双突变体主根表型分析 | 第66页 |
| 1.1.2 arf10/16双突变体根尖干细胞表型分析 | 第66-67页 |
| 1.2 过表达纯系植株的获得以及表型分析 | 第67-71页 |
| 1.2.1 载体构建 | 第67-68页 |
| 1.2.2 过表达植株的转染和筛选 | 第68页 |
| 1.2.3 ARF10和ARF16基因过表达株系过表达量验证 | 第68-69页 |
| 1.2.4 ARF10和ARF16基因过表达植株表型分析 | 第69-71页 |
| 2 arf10/16双突变体表达谱中表达量变化基因的研究 | 第71-91页 |
| 2.1 IAAn基因的相关研究 | 第71-82页 |
| 2.1.1 arf10,arf16和arf10/16双突变体中IAAn基因表达量检测 | 第71-72页 |
| 2.1.2 IAAn基因表达模式的研究 | 第72-73页 |
| 2.1.3 IAAn突变体的纯系鉴定及表型分析 | 第73-74页 |
| 2.1.4 IAAn基因超表达纯系植株的获得以及表型分析 | 第74-75页 |
| 2.1.5 ARF10和ARF16对IAAn基因的调控 | 第75-77页 |
| 2.1.6 IAAn基因蛋白互作网络的建立 | 第77-80页 |
| 2.1.7 双分子荧光互补验证实验 | 第80-82页 |
| 2.2 STOP2基因的相关研究 | 第82-86页 |
| 2.2.1 arf10,arf16和arf10/16双突变体中STOP2基因表达量检测 | 第82-83页 |
| 2.2.2 STOP2基因突变体的纯系鉴定及表型分析 | 第83-86页 |
| 2.3 TAT3基因的相关研究 | 第86-91页 |
| 2.3.1 arf10,arf16和arf10/16双突变体中TAT3基因表达量检测 | 第86-87页 |
| 2.3.2 TAT3基因基因突变体的纯系鉴定及表型分析 | 第87-91页 |
| 第三章 总结与讨论 | 第91-94页 |
| 1 关于ARF10和ARF16基因的总结与讨论 | 第91页 |
| 2 关于IAAn基因的总结与讨论 | 第91-92页 |
| 2.1 IAAn基因受生长素响应因子ARF10和ARF16的直接调控 | 第91页 |
| 2.2 IAAn蛋白可与生长素响应因子ARF10和ARF16发生互作 | 第91-92页 |
| 2.3 IAAn基因的时空表达分析 | 第92页 |
| 3 关于STOP2基因的总结与讨论 | 第92-93页 |
| 4 关于TAT3基因的总结与讨论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 发表文章 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 附件 | 第105页 |
