论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 藏红花酸研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 藏红花酸简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 藏红花酸的生物活性 | 第11页 |
| 1.1.3 藏红花酸的生产方法 | 第11-12页 |
| 1.1.4 藏红花酸的生物合成路径 | 第12-13页 |
| 1.2 前体类胡萝卜素研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 藻类提取类胡萝卜素 | 第14页 |
| 1.2.2 化学法合成类胡萝卜素 | 第14-15页 |
| 1.2.3 生物法合成类胡萝卜素 | 第15-18页 |
| 1.3 合成生物学简介 | 第18-20页 |
| 1.3.1 合成生物学的发展及应用 | 第18-19页 |
| 1.3.2 合成生物学在指导微生物改造中的常用优化策略 | 第19-20页 |
| 1.4 本课题的研究内容与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-47页 |
| 2.1 实验菌株与质粒 | 第22-27页 |
| 2.1.1 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） | 第22-25页 |
| 2.1.2 大肠杆菌（Escherichia coli） | 第25页 |
| 2.1.3 实验质粒 | 第25-27页 |
| 2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验试剂及配制 | 第28-32页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.3.2 常用试剂配制 | 第30-31页 |
| 2.3.3 培养基配制 | 第31-32页 |
| 2.4 DNA操作方法 | 第32-43页 |
| 2.4.1 目的片段的扩增和回收 | 第32-35页 |
| 2.4.2 酶切与连接 | 第35-36页 |
| 2.4.3 大肠杆菌转化方法 | 第36-37页 |
| 2.4.4 大肠杆菌中蓝白斑筛选方法 | 第37页 |
| 2.4.5 大肠杆菌菌落PCR方法 | 第37-39页 |
| 2.4.6 大肠杆菌质粒提取 | 第39页 |
| 2.4.7 酿酒酵母转化方法 | 第39-40页 |
| 2.4.8 5-氟乳清酸（5-FOA）敲除URA法 | 第40页 |
| 2.4.9 酿酒酵母菌落PCR方法 | 第40-42页 |
| 2.4.10 酿酒酵母质粒提取 | 第42页 |
| 2.4.11 酿酒酵母基因组提取 | 第42-43页 |
| 2.5 菌株发酵和产物提取 | 第43-44页 |
| 2.5.1 菌株的发酵培养 | 第43页 |
| 2.5.2 脂溶性类胡萝卜素的提取方法 | 第43-44页 |
| 2.5.3 藏红花酸的提取方法 | 第44页 |
| 2.6 产物HPLC检测与标准曲线的绘制 | 第44-47页 |
| 2.6.1 玉米黄质的检测方法及标准曲线 | 第44-45页 |
| 2.6.2 藏红花酸的检测方法及标准曲线 | 第45-47页 |
| 第三章 藏红花酸合成路径中外源基因的筛选 | 第47-63页 |
| 3.1 引言 | 第47-48页 |
| 3.2 合成前体玉米黄质重组菌株的构建与对照 | 第48-52页 |
| 3.2.1 整合型质粒载体和基因表达盒的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.2 玉米黄质重组菌株的获得 | 第50页 |
| 3.2.3 生产玉米黄质的关键酶 | 第50-52页 |
| 3.3 基因CrtZ和CCD的适配等因素对藏红花酸产量的影响 | 第52-58页 |
| 3.3.1 外源基因CCD表达盒的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 外源基因CrtZ和CCD的组合设计和菌株整合 | 第53-54页 |
| 3.3.3 发酵温度对藏红花酸产量的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.4 藏红花酸生产基因CrtZ和CCD的组合优化 | 第55-57页 |
| 3.3.5 添加剂Fe~(2+)对藏红花酸产量的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 ALD基因来源的筛选 | 第58-63页 |
| 3.4.1 ALD基因表达盒的构建 | 第58-59页 |
| 3.4.2 不同来源ALD产藏红花酸菌株的构建 | 第59-61页 |
| 3.4.3 藏红花酸合成基因ALD的优选 | 第61-63页 |
| 第四章 藏红花酸前体合成途径优化 | 第63-70页 |
| 4.1 引言 | 第63-64页 |
| 4.2 前体竞争路径关键基因的敲除对玉米黄质产量的影响 | 第64-66页 |
| 4.2.1 基因敲除盒的构建 | 第64-65页 |
| 4.2.2 单基因敲除和双基因敲除菌株的构建 | 第65页 |
| 4.2.3 竞争路径敲除对玉米黄质产量的影响 | 第65-66页 |
| 4.3 基因多拷贝表达与启动子的调节对玉米黄质产量的影响 | 第66-69页 |
| 4.3.1 基因CrtZ的表达强度的调控 | 第67页 |
| 4.3.2 基因CrtZ的拷贝数的调控 | 第67页 |
| 4.3.3 CrtZ的表达强度对玉米黄质产量的影响 | 第67-69页 |
| 4.4 CCD2拷贝数对藏红花酸产量的影响 | 第69-70页 |
| 4.4.1 CCD2多拷贝质粒的构建与重组菌株整合 | 第69页 |
| 4.4.2 CCD2的多拷贝对藏红花酸产量的影响 | 第69-70页 |
| 第五章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 5.1 结论 | 第70-71页 |
| 5.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
