论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 淀粉概述 | 第10页 |
| 1.2 淀粉酶 | 第10-14页 |
| 1.2.1 淀粉酶简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 淀粉酶分类 | 第11页 |
| 1.2.3 α-淀粉酶 | 第11-14页 |
| 1.3 耐高温α-淀粉酶 | 第14-16页 |
| 1.3.1 耐高温α-淀粉酶具有重要工业价值 | 第14页 |
| 1.3.2 耐高温α-淀粉酶的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的分子改造 | 第15-16页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌表达体系 | 第16-21页 |
| 1.4.1 枯草芽孢杆菌是主要的工业酶生产菌种 | 第16-17页 |
| 1.4.2 枯草芽孢杆菌研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.3 质粒表达系统 | 第18页 |
| 1.4.4 启动子的选择 | 第18-19页 |
| 1.4.5 信号肽 | 第19-21页 |
| 1.4.6 表达宿主 | 第21页 |
| 1.5 本课题研究思路 | 第21-23页 |
| 第二章 突变型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的初步表达 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 主要化学品与化学试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 工具酶与试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基 | 第24-27页 |
| 2.1.5 实验主要涉及仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 突变型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因（amyLM）的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.2 目的片段amyLM的克隆 | 第28页 |
| 2.2.3 pHP13-P43质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 pHP13-P43酶切线性化 | 第29-30页 |
| 2.2.5 PCR及质粒酶切产物的纯化 | 第30页 |
| 2.2.6 pHP13-P43-amyLM的构建 | 第30页 |
| 2.2.7 pHP13-P43-amyLM转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| 2.2.8 pHP13-P43-amyLM菌落PCR验证 | 第31-32页 |
| 2.2.9 pHP13-P43-amyLM转化枯草芽孢杆菌 | 第32-33页 |
| 2.2.10 B.subtilis 168(pHP13-P43-amyLM)的初步发酵 | 第33页 |
| 2.2.11 B.subtilis 168(pHP13-P43-amyLM)生长曲线测定 | 第33页 |
| 2.2.12 耐高温α-淀粉酶酶活测定 | 第33-34页 |
| 2.2.13 B.subtilis 168(pHP13-P43-amyLM)发酵产物鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第35-42页 |
| 2.3.1 pUC57-amyLM的酶切及测序鉴定 | 第35页 |
| 2.3.2 pHP13-P43-amyLM的构建 | 第35-37页 |
| 2.3.3 pHP13-P43-amyLM的酶切验证 | 第37-38页 |
| 2.3.4 pHP13-P43-amyLM菌落PCR验证 | 第38-40页 |
| 2.3.5 B.subtilis 168(pHP13-P43-amyLM)发酵产物鉴定 | 第40页 |
| 2.3.6 B.subtilis 168(pHP13-P43-amyLM)生长曲线以及酶活测定 | 第40-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 P43启动子介导amyLM在枯草芽孢杆菌WB00n中的表达优化 | 第43-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 主要化学品与化学试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 工具酶与试剂盒 | 第44页 |
| 3.1.4 主要溶液及培养基 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 重组质粒pHP13-P4318amyLM的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.2 重组质粒pHP13-P439amyLM的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.3 三种重组质粒转化枯草芽孢杆菌WB800n | 第48-49页 |
| 3.2.4 重组工程菌WB800n的初步发酵 | 第49页 |
| 3.2.5 重组工程菌WB800n发酵产物验证 | 第49页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第49-56页 |
| 3.3.1 重组质粒pHP13-P4318amyLM的构建验证 | 第49-50页 |
| 3.3.2 pHP13-P4318amyLM转化WB800n菌落PCR验证 | 第50-51页 |
| 3.3.3 重组质粒pHP13-P439amyLM的构建验证 | 第51页 |
| 3.3.4 pHP13-P439amyLM转化WB800n菌落PCR验证 | 第51-52页 |
| 3.3.5 pHP13-P4335amyLM转化WB800n菌落PCR验证 | 第52-53页 |
| 3.3.6 WB800n(pHP13-P4318amyLM)发酵产物验证 | 第53页 |
| 3.3.7 WB800n(pHP13-P439amyLM)发酵产物验证 | 第53-54页 |
| 3.3.8 WB800n(pHP13-P4335amyLM)发酵产物验证 | 第54-55页 |
| 3.3.9 三种重组工程菌WB800n发酵酶活比较 | 第55-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 麦芽糖诱导表达地衣芽孢杆菌野生型与突变型α-淀粉酶 | 第57-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第57页 |
| 4.1.2 主要化学品与化学试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 主要溶液与培养基配置 | 第57页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第57-61页 |
| 4.2.1 重组质粒pGJ148-amyL的构建 | 第57-59页 |
| 4.2.2 重组质粒pGJ148-amyLM的构建 | 第59-60页 |
| 4.2.3 pGJ148-amyL，pGJ148-amyLM菌落PCR验证 | 第60页 |
| 4.2.4 pGJ148-amyL，pGJ148-amyLM转化WB800n | 第60-61页 |
| 4.2.5 麦芽糖诱导浓度条件优化 | 第61页 |
| 4.2.6 WB800n(pGJ148-amyLM)，WB800n(pGJ148- amyL)发酵产物验证 | 第61页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第61-70页 |
| 4.3.1 重组质粒pGJ148-amyL的构建 | 第61-65页 |
| 4.3.2 重组质粒pGJ148-amyLM的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.3 pGJ148-amyL，pGJ148-amyLM菌落PCR验证 | 第66页 |
| 4.3.4 pGJ148-amyL，pGJ148-amyLM转化WB800n | 第66-68页 |
| 4.3.5 麦芽糖诱导浓度条件优化 | 第68页 |
| 4.3.6 WB800n(pGJ148-amyLM)，WB800n(pGJ148- amyL)发酵产物验证 | 第68-69页 |
| 4.3.7 WB800n(pGJ148-amyLM)，WB800n(pGJ148- amyL)酶活测定 | 第69-70页 |
| 4.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
