论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 qPCR技术原理及应用进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 qPCR技术 | 第10-11页 |
| 1.1.2 qPCR应用进展 | 第11页 |
| 1.2 内参基因的研究现状 | 第11-17页 |
| 1.2.1 内参基因简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 常用的内参基因 | 第12-13页 |
| 1.2.3 内参基因筛选的方法 | 第13-16页 |
| 1.2.4 内参基因的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 兰科植物开花研究进展 | 第17-22页 |
| 1.3.1 兰科植物试管开花研究现状 | 第17-19页 |
| 1.3.2 植物成花的分子调控 | 第19-20页 |
| 1.3.3 植物花的发端 | 第20页 |
| 1.3.4 植物花器官的发育 | 第20-22页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第2章 铁皮石斛候选内参基因克隆与qPCR标准体系的建立 | 第23-38页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 常用溶液配方 | 第24页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第24-25页 |
| 2.3.2 内参基因的选择和引物设计 | 第25-26页 |
| 2.3.3 候选内参基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 2.3.4 目的片段的回收、连接和转化 | 第26-27页 |
| 2.3.5 菌液PCR检测和测序 | 第27页 |
| 2.3.6 标准品的制备 | 第27-28页 |
| 2.3.7 标准曲线的制备及引物扩增效率的测定 | 第28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.4.1 铁皮石斛总RNA的质量检测 | 第28-29页 |
| 2.4.2 候选内参基因克隆 | 第29-33页 |
| 2.4.3 内参基因荧光定量PCR分析 | 第33-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-38页 |
| 2.5.1 铁皮石斛候选内参基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.5.2 qPCR标准体系的建立 | 第37-38页 |
| 第3章 铁皮石斛不同组织和不同生长阶段内参基因的筛选 | 第38-51页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第39页 |
| 3.2.3 三种内参基因表达稳定性评估软件 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.3.1 总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第39页 |
| 3.3.2 标准曲线的制备及引物扩增效率的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.3 内参基因稳定性分析 | 第40页 |
| 3.4 结果与分析 | 第40-49页 |
| 3.4.1 六种不同组织中候选内参基因表达稳定性分析 | 第40-43页 |
| 3.4.2 不同生长阶段内参基因表达稳定性分析 | 第43-46页 |
| 3.4.3 FPS在铁皮石斛不同组织中与生长阶段中的荧光定量分析 | 第46-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 3.5.1 铁皮石斛不同组织中和不同生长阶段内参基因的筛选 | 第49-50页 |
| 3.5.2 三个内参基因表达稳定性评估软件 | 第50页 |
| 3.5.3 FPS在不同组织和不同生长发育阶段的表达分析 | 第50-51页 |
| 第4章 铁皮石斛非生物胁迫条件下内参基因的筛选 | 第51-59页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 材料 | 第51页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第51页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.3.1 总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第51页 |
| 4.3.2 标准曲线的制备及引物扩增效率的测定 | 第51页 |
| 4.3.3 内参基因稳定性分析 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与分析 | 第52-57页 |
| 4.4.1 温度胁迫条件下内参基因表达稳定性分析 | 第52-55页 |
| 4.4.2 干旱胁迫条件下内参基因稳定性分析 | 第55-57页 |
| 4.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第5章 铁皮石斛开花相关基因的表达分析 | 第59-68页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 材料与方法 | 第59页 |
| 5.2.1 材料 | 第59页 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 5.3.1 多激素诱导铁皮石斛开花 | 第59页 |
| 5.3.2 铁皮石斛开花相关基因的克隆 | 第59-60页 |
| 5.3.3 铁皮石斛开花相关基因的荧光定量PCR分析 | 第60页 |
| 5.4 结果与分析 | 第60-65页 |
| 5.4.1 多激素诱导铁皮石斛开花 | 第60-61页 |
| 5.4.2 铁皮石斛开花相关基因的克隆 | 第61-64页 |
| 5.4.3 铁皮石斛开花相关基因的荧光定量PCR分析 | 第64-65页 |
| 5.5 讨论 | 第65-68页 |
| 第6章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 6.1 结论 | 第68页 |
| 6.2 展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
