论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第10-11页 |
| 1.2 发展概况 | 第11页 |
| 1.3 S层蛋白的性质 | 第11-12页 |
| 1.3.1 基因的可变性 | 第12页 |
| 1.3.2 具有锚定功能的基因 | 第12页 |
| 1.4 S层蛋白对乳酸杆菌性质的影响及保护作用 | 第12-14页 |
| 1.4.1 S层蛋白对乳酸杆菌表面性质的影响 | 第12-13页 |
| 1.4.2 S层蛋白对乳酸杆菌黏附性的影响 | 第13页 |
| 1.4.3 S层蛋白对菌体的保护作用 | 第13-14页 |
| 1.5 S层蛋白在乳酸杆菌调节肠道功能中的作用 | 第14-17页 |
| 1.5.1 S层蛋白对细胞的调节作用 | 第14-15页 |
| 1.5.2 S层蛋白参与免疫调控的信号通路 | 第15-16页 |
| 1.5.3 S层蛋白对肠道黏膜的保护作用 | 第16-17页 |
| 1.6 本文的主要研究内容 | 第17-18页 |
| 1.6.1 S层蛋白的提取方法比较、纯化及鉴定 | 第17页 |
| 1.6.2 S层蛋白及S. sonnei对HT-29 细胞增殖和细胞形态影响的研究 | 第17页 |
| 1.6.3 对NF-κB通路的相关基因和蛋白表达量的研究 | 第17页 |
| 1.6.4 阻断TLR2/4 对NF-κB通路的相关基因和蛋白表达的研究 | 第17-18页 |
| 1.7 技术路线 | 第18-19页 |
| 第2章 材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 药品与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 菌种和细胞 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.2 菌株处理 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌体的活化及培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 菌落计数 | 第23页 |
| 2.3 S层蛋白的提取、纯化及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.1 提取方法的比较 | 第23页 |
| 2.3.2 S层蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE测定S层蛋白的分子量 | 第24页 |
| 2.3.4 BCA法测定S层蛋白浓度 | 第24页 |
| 2.4 S层蛋白及致病菌对HT-29 细胞的干预处理 | 第24-26页 |
| 2.4.1 细胞处理 | 第24-25页 |
| 2.4.2 干预处理 | 第25页 |
| 2.4.3 MTT法检测细胞的活性 | 第25-26页 |
| 2.4.4 NO试剂盒测HT-29 细胞上清液中NO的含量变化 | 第26页 |
| 2.4.5 PGE2试剂盒测HT-29 细胞上清液中PGE2的含量变化 | 第26页 |
| 2.5 RT-qPCR法分析HT-29 细胞中相关基因的表达情况 | 第26-28页 |
| 2.6 流式细胞术检测HT-29 细胞上TLR2和TLR4的表达 | 第28页 |
| 2.7 中和抗体对细胞的TLR2和TLR4阻断 | 第28-29页 |
| 2.7.1 中和抗体处理细胞 | 第28-29页 |
| 2.7.2 阻断后实验分组 | 第29页 |
| 2.8 ELISA测定阻断实验细胞上清中TNF-α 和IL-8 的含量变化 | 第29-30页 |
| 2.9 荧光显微镜观察细胞NF-κB p65的核转位情况 | 第30-31页 |
| 2.10 数据处理及绘图 | 第31-32页 |
| 第3章 L. casei Q8-L S层蛋白和S. sonnei对HT-29 细胞增殖及形态影响的研究 | 第32-41页 |
| 3.1 S层蛋白的分离纯化 | 第32-34页 |
| 3.1.1 S层蛋白的SDS-PAGE | 第32-34页 |
| 3.1.2 BCA法测定S层蛋白的浓度 | 第34页 |
| 3.2 致病菌的菌落计数 | 第34页 |
| 3.3 MTT实验测定HT-29 细胞的活性 | 第34-38页 |
| 3.3.1 S层蛋白与S. sonnei对HT-29 细胞活性的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.2 不同S. sonnei的感染复数对HT-29 细胞活性的影响 | 第35-38页 |
| 3.4 不同处理下的HT-29 细胞学研究 | 第38-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-41页 |
| 第4章 L. casei Q8-L S层蛋白对HT-29 细胞NF-κB通路相关蛋白表达的影响研究 | 第41-65页 |
| 4.1 HT-29 细胞上清液中PGE2的含量 | 第42-43页 |
| 4.2 HT-29 细胞上清液中NO的含量 | 第43-45页 |
| 4.3 荧光定量PCR法测定相关基因的表达情况 | 第45-53页 |
| 4.3.1 PCR产物的鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 TLR受体基因的表达 | 第46-48页 |
| 4.3.3 NOD受体的表达 | 第48-50页 |
| 4.3.4 COX-2 和PPAR-γ 的表达 | 第50-53页 |
| 4.4 流式细胞仪对HT-29 细胞上TLR2表达的研究 | 第53-56页 |
| 4.5 流式细胞仪对HT-29 细胞上TLR4表达的研究 | 第56-59页 |
| 4.6 免疫荧光法分析细胞NF-κB p65的核转位情况 | 第59-63页 |
| 4.7 本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 TLR2/4 对S层蛋白调控NF-κB通路的关键作用研究 | 第65-80页 |
| 5.1 阻断处理对S层蛋白调控HT-29 细胞的研究 | 第65-69页 |
| 5.1.1 不同阻断处理对S层蛋白调控细胞产生细胞因子的影响 | 第65-67页 |
| 5.1.2 不同阻断处理对S层蛋白调控细胞相关基因表达的影响 | 第67-69页 |
| 5.2 阻断处理对S层蛋白调控炎症细胞的研究 | 第69-75页 |
| 5.2.1 阻断处理对S层蛋白调控炎症细胞产生细胞因子的影响 | 第69-71页 |
| 5.2.2 阻断处理对S层蛋白及致病菌刺激细胞相关基因表达的影响 | 第71-75页 |
| 5.3 阻断处理对各组细胞NF-κB p65核转位的影响 | 第75-79页 |
| 5.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
