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一种新型母乳抗菌肽CN20在大肠杆菌中的融合表达、纯化及其活性研究
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一种新型母乳抗菌肽CN20在大肠杆菌中的融合表达、纯化及其活性研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-10页
缩略词表第10-11页
第1章 前言第11-26页
　　1.1 母乳概述第11-12页
　　1.2 抗菌肽概述第12-16页
　　　　1.2.1 抗菌肽分类第12-13页
　　　　1.2.2 抗菌肽来源第13-14页
　　　　1.2.3 抗菌肽生物活性第14-16页
　　1.3 基因工程表达系统和策略研究第16-20页
　　　　1.3.1 质粒和菌株第16-17页
　　　　1.3.2 抗菌肽表达策略第17-18页
　　　　1.3.3 抗菌肽的修饰改造第18-20页
　　1.4 抗菌肽活性鉴定第20-21页
　　　　1.4.1 琼脂糖孔穴扩散法第20-21页
　　　　1.4.2 比浊法第21页
　　　　1.4.3 活菌计数法第21页
　　1.5 抗菌肽抗菌机理第21-23页
　　　　1.5.1 细胞膜破坏模式第22-23页
　　　　1.5.2 细菌胞内靶点第23页
　　　　1.5.3 免疫效应分子第23页
　　1.6 抗菌肽应用前景第23-25页
　　　　1.6.1 抗菌肽在基因工程方面的应用第23-24页
　　　　1.6.2 抗菌肽在医药方面的应用第24页
　　　　1.6.3 抗菌肽在动物饲料方面的应用第24页
　　　　1.6.4 抗菌肽在食品方面的应用第24-25页
　　1.7 本研究的意义和内容第25-26页
　　　　1.7.1 本课题的研究内容第25页
　　　　1.7.2 本课题研究意义第25-26页
第2章 母乳中内源性多肽的分离及抗菌功能初步鉴定第26-37页
　　2.1 材料与设备第26-28页
　　　　2.1.1 实验材料第26页
　　　　2.1.2 实验主要材料及试剂第26-27页
　　　　2.1.3 实验仪器及设备第27-28页
　　2.2 实验方法第28-31页
　　　　2.2.1 母乳脱脂第28页
　　　　2.2.2 超滤分离小分子多肽第28-29页
　　　　2.2.3 母乳中多肽分离测定——Tricine-SDS-PAGE第29-30页
　　　　2.2.4 内源性多肽抑菌实验第30-31页
　　　　2.2.5 LC-MS/MS鉴定内源性多肽第31页
　　　　2.2.6 生物信息学分析预测抗菌成分第31页
　　　　2.2.7 化学合成预测抗菌肽活性测定第31页
　　2.3 实验结果第31-35页
　　　　2.3.1 母乳中内源性多肽的分离鉴定(Tricine-SDS-PAGE)第32-33页
　　　　2.3.3 生物信息学预测抗菌成分第33-35页
　　2.4 讨论第35-37页
第3章 CN20在大肠杆菌中的克隆、表达优化及蛋白纯化第37-61页
　　3.1 材料与设备第37-41页
　　　　3.1.1 引物第37页
　　　　3.1.2 菌株与质粒第37-38页
　　　　3.1.3 培养基及抗生素第38-39页
　　　　3.1.4 工具酶及试剂盒第39页
　　　　3.1.5 实验主要试剂第39-40页
　　　　3.1.6 实验仪器与设备第40-41页
　　3.2 实验方法第41-49页
　　　　3.2.1 CN20原核表达载体的构建第41-46页
　　　　3.2.2 CN20表达条件的优化第46-47页
　　　　3.2.3 CN20融合蛋白纯化及western-Blot鉴定第47-48页
　　　　3.2.4 CN20融合蛋白标签切除第48-49页
　　　　3.2.5 CN20蛋白浓度测定第49页
　　3.3 实验结果第49-59页
　　　　3.3.1 密码子优化第49-51页
　　　　3.3.2 表达载体的构建第51-52页
　　　　3.3.3 CN20融合蛋白诱导表达第52页
　　　　3.3.4 融合蛋白表达条件优化第52-56页
　　　　3.3.5 CN20融合蛋白纯化及western-Blot鉴定第56-58页
　　　　3.3.6 CN20融合蛋白标签切除第58页
　　　　3.3.7 CN20蛋白浓度测定第58-59页
　　3.4 讨论第59-61页
第4章 CN20抗菌活性研究第61-67页
　　4.1 材料与设备第61-62页
　　　　4.1.1 菌种第61页
　　　　4.1.2 培养基第61页
　　　　4.1.3 实验仪器与设备第61-62页
　　4.2 实验方法第62-63页
　　　　4.2.1 抗菌肽抗菌活性检测第62页
　　　　4.2.2 抗菌谱的测定第62页
　　　　4.2.3 抗菌效果与抗菌时间的关系研究第62-63页
　　　　4.2.4 数据处理与分析第63页
　　4.3 实验结果第63-65页
　　　　4.3.1 抗菌肽抗菌活性检测第63页
　　　　4.3.2 抗菌谱的测定第63-64页
　　　　4.3.3 抗菌肽抗菌效果与抗菌时间的关系研究第64-65页
　　4.4 讨论第65-67页
全文结论第67-68页
论文创新点第68-69页
展望第69-70页
参考文献第70-77页
致谢第77页

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