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荧光假单胞菌GcM5-1A溶血素的基因克隆及其活性研究

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荧光假单胞菌GcM5-1A溶血素的基因克隆及其活性研究
论文目录
 
摘要第1-3页
Abstract第3-7页
引言第7-8页
一、材料与方法第8-23页
  1.1 实验材料第8-11页
    1.1.1 菌株与载体第8页
    1.1.2 主要仪器设备第8页
    1.1.3 主要试剂第8-10页
    1.1.4 主要溶液和培养基及其配制第10-11页
  1.2 实验方法第11-23页
    1.2.1 荧光假单胞菌GcM5-1A基因组的提取第11-12页
    1.2.2 溶血素基因的扩增第12-13页
    1.2.3 扩增产物回收第13页
    1.2.4 溶血素基因与中间载体重组第13-14页
    1.2.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备和质粒的转化第14-15页
    1.2.6 重组质粒的提取第15页
    1.2.7 重组质粒的PCR验证及双酶切鉴证第15-16页
    1.2.8 PCR产物的序列分析第16页
    1.2.9 构建表达载体pET-15b-Hly第16-18页
    1.2.10 构建表达溶血素工程菌第18页
    1.2.11 荧光假单胞菌GcM5-1A溶血素基因在工程菌中的诱导表达第18-19页
    1.2.12 重组蛋白的分离纯化第19页
    1.2.13 溶血素Hly溶血活性检测第19-20页
    1.2.14 聚乙二醇对溶血素溶血活性的影响第20页
    1.2.15 不同浓度的二价金属离子对重组溶血素溶血活性的影响第20-21页
    1.2.16 溶血素经沸水浴处理后的溶血活性第21页
    1.2.17 EDTA、PMSF对溶血素溶血活性的影响第21-22页
    1.2.18 溶血素Hly对黑松幼苗的毒性检测第22页
    1.2.19 溶血素Hly对黑松愈伤组织细胞的毒性检测第22-23页
二、结果与分析第23-37页
  2.1 实验结果第23-36页
    2.1.1 荧光假单胞菌GcM5-1A基因组提取第23页
    2.1.2 溶血素基因PCR扩增第23-24页
    2.1.3 重组质粒的PCR和双酶切验证第24-26页
    2.1.4 序列分析第26-27页
    2.1.5 重组表达载体的双酶切验证第27-28页
    2.1.6 重组蛋白的诱导表达及纯化第28-29页
    2.1.7 溶血素Hly溶血活性第29-30页
    2.1.8 聚乙二醇对溶血素溶血活性的影响第30-31页
    2.1.9 不同浓度的二价金属离子对重组溶血素溶血活性的影响第31-32页
    2.1.10 溶血素经沸水浴处理后的溶血活性第32页
    2.1.11 EDTA及PMSF对溶血素溶血活性的影响第32-33页
    2.1.12 溶血素Hly对黑松幼苗的毒性第33-34页
    2.1.13 溶血素Hly对黑松愈伤组织细胞的毒性第34-36页
  2.2 结果分析第36-37页
三、全文讨论与结论第37-39页
参考文献第39-41页
综述第41-57页
1.松材线虫病简介第41页
2.松材线虫病致病机理假说第41-48页
  2.1 单一病原假说第41-44页
    2.1.1 松材线虫分泌的纤维素酶对松萎蔫病的影响第42页
    2.1.2 松材线虫侵染后宿主应激反应对松萎蔫病的影响第42-44页
  2.2 松材线虫与其相关细菌复合侵染假说第44-48页
    2.2.1 细菌参与到松萎蔫病的发展第45-46页
    2.2.2 细菌在松萎蔫病发展中的作用第46-48页
结语第48-50页
综述参考文献第50-57页
攻读学位期间的研究成果第57-58页
致谢第58-59页

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