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玉米抗冷基因ZmGDH2的功能分析及遗传转化的研究

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玉米抗冷基因ZmGDH2的功能分析及遗传转化的研究
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-9页
英文缩写词第9-14页
第1章 文献综述第14-25页
  1.1 冷胁迫是影响作物产量的最重要因素之一第14-15页
    1.1.1 低温对玉米生长的影响第14-15页
    1.1.2 苗期冷害对吉林省玉米生产的影响第15页
  1.2 低温调节基因表达信号网络第15-18页
    1.2.1 冷信号第15-16页
    1.2.2 冷信号转录调节第16-18页
  1.3 蛋白质组学在低温胁迫下的应用第18-19页
  1.4 谷氨酸脱氢酶(GDH)的研究第19-22页
    1.4.1 GDH在碳氮代谢中的作用第19-20页
    1.4.2 GDH在逆境条件下的作用第20-21页
    1.4.3 GDH转基因植物的研究现状第21-22页
  1.5 转基因技术与传统育种的区别第22-23页
    1.5.1 涵义不同第22-23页
    1.5.2 基因转移的范围和效率不同第23页
  1.6 本研究的目的和意义第23-25页
第2章 ZmGDH2基因的克隆及表达分析第25-39页
  2.1 材料与方法第25-32页
    2.1.1 实验菌种与载体第25-26页
    2.1.2 试剂第26页
    2.1.3 培养基配方第26页
    2.1.4 实验仪器第26-27页
    2.1.5 植物材料及培养条件第27页
    2.1.6 总RNA的提取第27-28页
    2.1.7 cDNA的合成第28页
    2.1.8 引物设计第28-29页
    2.1.9 目的基因的克隆第29页
    2.1.10 目的片段的回收第29-30页
    2.1.11 回收产物的平末端加A第30页
    2.1.12 目的片段与T载体的连接第30-31页
    2.1.13 连接产物转化大肠杆菌第31页
    2.1.14 菌液检测第31页
    2.1.15 测序第31-32页
    2.1.16 qRT-PCR检测第32页
  2.2 结果与分析第32-38页
    2.2.1 ZmGDH2基因的克隆第32-33页
    2.2.2 生物信息学分析第33-36页
    2.2.3 ZmGDH2表达量分析第36-38页
  2.3 讨论第38页
  2.4 小结第38-39页
第3章 ZmGDH2基因表达载体的构建和功能分析第39-53页
  3.1 材料和方法第39-46页
    3.1.1 植物材料第39页
    3.1.2 生长条件第39页
    3.1.3 所需试剂、及培养基及所用仪器第39页
    3.1.4 质粒的提取第39-40页
    3.1.5 酶切第40页
    3.1.6 连接表达载体第40页
    3.1.7 农杆菌的转化第40-41页
    3.1.8 重测序第41页
    3.1.9 拟南芥的转化第41-42页
    3.1.10 抗性拟南芥筛选第42页
    3.1.11 CTAB法提取DNA第42页
    3.1.12 PCR检测第42页
    3.1.13 RT-PCR检测第42-43页
    3.1.14 突变体纯合性检测第43-44页
    3.1.15 生理生化指标测定第44-46页
  3.2 结果与分析第46-51页
    3.2.1 ZmGDH2过表达载体的构建第46-47页
    3.2.2 抗性拟南芥的筛选第47页
    3.2.3 转基因拟南芥的分子检测第47-49页
    3.2.4 突变体纯合性检测第49页
    3.2.5 ZmGDH2过表达植株抗冻分析第49-50页
    3.2.7 生理生化指标测定第50-51页
  3.3 讨论第51-52页
  3.4 小结第52-53页
第4章 ZmGDH2基因在玉米中的遗传转化研究第53-65页
  4.1 材料与方法第53-56页
    4.1.1 实验材料第53页
    4.1.2 实验菌种与载体第53页
    4.1.3 实验试剂和仪器第53页
    4.1.4 实验所需培养基第53-54页
    4.1.5 幼胚的获取第54页
    4.1.6 体细胞胚胎的诱导第54页
    4.1.7 农杆菌介导转化玉米幼胚第54-55页
    4.1.8 农杆菌介导转化玉米体细胞胚胎第55页
    4.1.9 分子检测第55-56页
  4.2 结果与分析第56-62页
    4.2.1 农杆菌介导玉米幼胚的遗传转化第56-57页
    4.2.2 农杆菌介导愈伤组织的遗传转化第57-59页
    4.2.3 遗传体系的优化第59-61页
    4.2.4 转化植株分子检测第61页
    4.2.5 转化植株的qRT-PCR检测第61-62页
    4.2.6 转基因种子的获得第62页
  4.3 讨论第62-64页
    4.3.1 农杆菌菌种对遗传转化的影响第63页
    4.3.2 菌液OD、侵染时间对遗传转化的影响。第63-64页
    4.3.3 葡萄糖对转化率的影响第64页
    4.3.4 热激对转化率的影响第64页
  4.4 小结第64-65页
第5章 花粉管通道法转化玉米的研究第65-71页
  5.1 材料和方法第65-66页
    5.1.1 实验材料第65页
    5.1.2 实验菌种和载体第65页
    5.1.3 实验药品及仪器第65页
    5.1.4 重组质粒DNA的制备第65-66页
    5.1.5 重组质粒的导入第66页
    5.1.6 T0代植株的筛选第66页
  5.2 结果与分析第66-69页
    5.2.1 转化植株的Basta抗性筛选第66-67页
    5.2.2 转化植株分子检测第67-68页
    5.2.3 转基因材料的获得第68-69页
  5.3 讨论第69-70页
  5.4 小结第70-71页
第6章 全文结论第71-72页
参考文献第72-81页
作者简介及科研成果第81-82页
致谢第82页

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