论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-12页 |
1 引言 | 第12-25页 |
1.1 毛发和毛囊的结构 | 第12-13页 |
1.2 毛囊生长发育过程的调控机制 | 第13-15页 |
1.2.1 Wnt信号通路对毛囊的调控 | 第13-14页 |
1.2.2 BMP家族对毛囊的作用 | 第14页 |
1.2.3 Notch信号调控 | 第14-15页 |
1.2.4 Hairless基因对毛囊周期的调控 | 第15页 |
1.3 Hairless基因的结构和功能 | 第15-16页 |
1.4 与毛发相关的疾病研究 | 第16-17页 |
1.5 课题研究背景 | 第17-18页 |
1.6 实验动物模型的意义及种类 | 第18-19页 |
1.7 基因敲除技术的发展概述 | 第19-23页 |
1.7.1 锌指核酸酶(Zinc Finger nucleases,ZFN)技术 | 第20-21页 |
1.7.2 转录激活子样效应物核酸酶 (Transcription Activator-like Effector nucleases,TALEN)技术 | 第21-22页 |
1.7.3 CRISPR-Cas(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats-CRISPR associated systems)技术 | 第22-23页 |
1.8 基因敲除技术的展望 | 第23页 |
1.9 本研究课题的主要研究内容和意义 | 第23-24页 |
1.10 本课题的创新点 | 第24-25页 |
2 Hr基因敲除小鼠的构建与繁育 | 第25-45页 |
2.1 材料与仪器 | 第25-27页 |
2.1.1 实验材料 | 第25页 |
2.1.2 主要实验仪器 | 第25-26页 |
2.1.3 主要实验试剂及配制方法 | 第26页 |
2.1.4 主要软件与数据库 | 第26-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-31页 |
2.2.1 Hr基因敲除TALEN载体的在线设计与选择 | 第27页 |
2.2.2 扩增C57BL/6J小鼠Hr基因 | 第27-31页 |
2.3 实验结果 | 第31-44页 |
2.3.1 小鼠Hr基因敲除靶点的设计 | 第31-32页 |
2.3.2 验证引物扩增条带的特异性 | 第32页 |
2.3.3 TALEN载体的设计与组装构建 | 第32-34页 |
2.3.4 F0代小鼠的鉴定结果 | 第34-36页 |
2.3.5 F1代小鼠的鉴定结果 | 第36-39页 |
2.3.6 基因敲除小鼠Hr基因外显子的扩增鉴定 | 第39-43页 |
2.3.7 Hr基因敲除小鼠品系的繁殖 | 第43-44页 |
2.4 讨论 | 第44-45页 |
3 Hr基因敲除小鼠的形态学和组织学观察 | 第45-53页 |
3.1 材料与仪器 | 第45-46页 |
3.1.1 实验动物 | 第45页 |
3.1.2 主要实验试剂配制方法 | 第45页 |
3.1.3 主要实验仪器 | 第45-46页 |
3.2 实验方法 | 第46-47页 |
3.2.1 每天观察记录Hr基因敲除小鼠的毛发形态 | 第46页 |
3.2.2 Hr基因敲除小鼠的皮肤组织学切片 | 第46-47页 |
3.3 实验结果 | 第47-51页 |
3.3.1 Hr基因敲除小鼠的形态学观察 | 第47-49页 |
3.3.2 Hr基因敲除小鼠皮肤组织学观察结果 | 第49-51页 |
3.4 讨论 | 第51-53页 |
4 检测敲除小鼠皮肤组织中Hr的表达部位和水平 | 第53-69页 |
4.1 材料与仪器 | 第53-55页 |
4.1.1 实验动物 | 第53页 |
4.1.2 主要实验试剂及配制 | 第53-54页 |
4.1.3 主要实验耗材及仪器 | 第54-55页 |
4.2 实验方法 | 第55-62页 |
4.2.1 免疫组化 | 第55-57页 |
4.2.2 实时荧光定量PCR | 第57-59页 |
4.2.3 蛋白印迹法(western blot) | 第59-62页 |
4.3 实验结果 | 第62-67页 |
4.3.1 皮肤组织切片的免疫组化结果 | 第62-64页 |
4.3.2 荧光定量PCR结果 | 第64-66页 |
4.3.3 Western blot实验结果 | 第66-67页 |
4.4 讨论 | 第67-69页 |
5 全文小结 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-75页 |
附录 | 第75-76页 |
个人简历、硕士期间发表文章 | 第76-77页 |
致谢 | 第77页 |