论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-30页 |
| 1.1 密码子 | 第9-13页 |
| 1.1.1 密码子种类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 密码子特点 | 第10页 |
| 1.1.3 氨基酸对应的密码子表 | 第10-11页 |
| 1.1.4 终止密码子 | 第11-13页 |
| 1.2 非编码氨基酸 | 第13-18页 |
| 1.2.1 非编码氨基酸的无细胞表达系统 | 第15-17页 |
| 1.2.2 非编码氨基酸的大肠杆菌表达系统 | 第17-18页 |
| 1.3 金属结合蛋白 | 第18-23页 |
| 1.3.1 8-羟基喹啉丙氨酸 | 第18-19页 |
| 1.3.2 金属结合蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.3 金属硫蛋白 | 第20-23页 |
| 1.4 非编码氨基酸的表达 | 第23-27页 |
| 1.4.1 蛋白质的翻译表达 | 第23-26页 |
| 1.4.2 氨基酰-tRNA | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第27-30页 |
| 第二章 材料和方法 | 第30-39页 |
| 2.1 实验中用到的试剂 | 第30-31页 |
| 2.2 实验中用到的仪器 | 第31页 |
| 2.3 引物的溶解 | 第31-32页 |
| 2.4 点突变 | 第32-33页 |
| 2.4.1 PCR | 第32页 |
| 2.4.2 OE-PCR | 第32-33页 |
| 2.5 载体构建与测序 | 第33-37页 |
| 2.5.1 质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.5.2 限制性内切酶消化 | 第34-35页 |
| 2.5.3 重组载体的连接 | 第35页 |
| 2.5.4 重组载体的热激转化 | 第35-36页 |
| 2.5.5 阳性克隆的菌落PCR法鉴定 | 第36-37页 |
| 2.6 外源蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 2.7 外源蛋白的金属离子结合能力测定 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-57页 |
| 3.1 PEVOL载体 | 第39页 |
| 3.2 HQALA配对TRNA合成酶基因序列比对 | 第39-42页 |
| 3.3 定点突变引物序列 | 第42页 |
| 3.4 定点突变结果 | 第42-43页 |
| 3.5 掺入HQALA金属硫蛋白的基因合成 | 第43-54页 |
| 3.5.1 金属硫蛋白的基因序列 | 第43页 |
| 3.5.2 逆编码所用大肠杆菌密码子频率表 | 第43-45页 |
| 3.5.3 E. coli偏爱密码子编码的MT1A基因 | 第45页 |
| 3.5.4 拟合成序列全长 | 第45页 |
| 3.5.5 单链寡核苷酸的拆分 | 第45-47页 |
| 3.5.6 化学合成寡核苷酸的溶解与混合 | 第47-50页 |
| 3.5.7 两步法合成结果 | 第50-52页 |
| 3.5.8 亚克隆载体构建与测序 | 第52-54页 |
| 3.6 MT1A-GFP融合表达载体构建 | 第54-55页 |
| 3.6.1 表达载体pET-MT1A-GFP的构建 | 第54页 |
| 3.6.2 重组子的菌落PCR鉴定 | 第54页 |
| 3.6.3 重组载体pET-MT1A-GFP的诱导表达 | 第54-55页 |
| 3.7 MT1A-GFP融合蛋白的金属结合能力测试 | 第55-57页 |
| 3.7.1 纯化MT1A-GFP融合蛋白对水环境中的镍离子结合实验 | 第55页 |
| 3.7.2 纯化MT1A-GFP融合蛋白对水环境中的铜离子结合实验 | 第55-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
