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人及斑马鱼调控xkr基因的microRNA的鉴定

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人及斑马鱼调控xkr基因的microRNA的鉴定
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-13页
第一章 前言第13-30页
  1.1 程序性细胞死亡第13-17页
    1.1.1 概述第13-16页
    1.1.2 线虫程序性细胞死亡的研究第16-17页
  1.2 XKR蛋白家族第17-19页
    1.2.1 线虫ced-8基因及其人同源物xkr基因第17-18页
    1.2.2 XKR蛋白家族与细胞凋亡第18-19页
  1.3 microRNA概述第19-29页
    1.3.1 RNA与非编码RNA第19-21页
    1.3.2 microRNA的发现及研究第21-22页
    1.3.3 microRNA生物起源与加工第22-23页
    1.3.4 miRNA的作用方式及分类第23-24页
    1.3.5 miRNA与siRNA的异同第24-28页
    1.3.6 microRNA与细胞凋亡第28-29页
  1.4 本研究的目的与意义第29-30页
第二章 材料与方法第30-53页
  2.1 实验材料第30-37页
    2.1.1 仪器及设备第30-31页
    2.1.2 生化试剂及试剂盒第31-34页
    2.1.3 在线预测工具第34页
    2.1.4 细胞株与菌株第34-35页
    2.1.5 引物序列及其他寡核苷酸序列第35-37页
  2.2 实验方法第37-53页
    2.2.1 细胞的培养第37-38页
    2.2.2 细胞凋亡诱导模型的建立第38页
    2.2.3 细胞总RNA的提取第38-39页
    2.2.4 RNA的反转录第39-40页
    2.2.5 半定量RT-PCR第40-41页
    2.2.6 荧光定量PCR第41-42页
    2.2.7 细胞基因组DNA的提取第42-43页
    2.2.8 目的片断的PCR扩增第43页
    2.2.9 PCR产物与载体的酶切第43-45页
    2.2.10 PCR产物与载体的胶回收第45-46页
    2.2.11 目的片段与载体的连接第46页
    2.2.12 感受态大肠杆菌DH5α的制备第46-47页
    2.2.13 连接产物的转化第47页
    2.2.14 阳性重组子的鉴定及测序第47页
    2.2.15 去内毒素质粒的提取第47-48页
    2.2.16 定点突变载体的构建第48-49页
    2.2.17 细胞转染第49页
    2.2.18 双荧光素酶报告基因检测第49-50页
    2.2.19 稳定转染细胞株的建立第50-51页
    2.2.20 Western Blot免疫印迹杂交第51-53页
第三章 结果与分析第53-89页
  3.1 xkr1在细胞凋亡中的动力学变化第53-55页
  3.2 计算预测第55-57页
  3.3 载体构建第57-61页
    3.3.1 获得的目的基因第57-59页
    3.3.2 重组载体的酶切鉴定第59-61页
  3.4 调控xkr家族基因microRNA的初步筛选第61-64页
    3.4.1 调控xkr1基因microRNA的初步筛选第61-62页
    3.4.2 调控xkr6基因microRNA的初步筛选第62-64页
    3.4.3 调控xkr8基因microRNA的初步筛选第64页
  3.5 细胞外源xkr家族基因与microRNA的相互作用第64-75页
    3.5.1 构建的定点突变载体第65页
    3.5.2 细胞外源xkr1基因与microRNA的相互作用第65-67页
    3.5.3 细胞外源xkr4基因与miR-29b的相互作用第67-68页
    3.5.4 细胞外源xkr6基因与microRNA的相互作用第68-72页
    3.5.5 细胞外源xkr7基因与miR-29b的相互作用第72页
    3.5.6 细胞外源xkr8基因与microRNA的相互作用第72-73页
    3.5.7 斑马鱼细胞外源xkr基因与dre-miR-29b的相互作用第73-75页
  3.6 细胞内源xkr家族基因与microRNA的相互作用第75-86页
    3.6.1 293T细胞稳转株的建立第75-76页
    3.6.2 细胞内源xkr1基因与microRNA的相互作用第76-78页
    3.6.3 细胞内源xkr6基因与microRNA的相互作用第78-84页
    3.6.4 细胞内源xkr8基因与microRNA的相互作用第84-86页
  3.7 结论第86-89页
第四章 讨论与展望第89-96页
  4.1 双荧光素酶报告基因检测系统在本研究中的应用第89-90页
  4.2 促进/抑制凋亡microRNA的分类第90-92页
  4.3 miRNA-xkr互作的保守性分析第92-94页
  4.4 展望第94-96页
参考文献第96-105页
攻读学位期间发表论文情况第105-106页
致谢第106页

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