论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写表 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| RAD6基因 | 第12-15页 |
| 1.1 RAD6的结构与生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.1.1 RAD6与RAD18泛素化增值性细胞核抗原(PCNA)级联下游旁路修复 | 第12-13页 |
| 1.1.2 RAD6与Bre1泛素化组蛋白H2B修饰途径 | 第13页 |
| 1.1.3 RAD6与Ubrl介导的N末端规则(N-end rule) | 第13-14页 |
| 1.2 秀丽隐杆线虫的UBC-1(RAD6)基因 | 第14-15页 |
| 秀丽隐杆线虫 | 第15-21页 |
| 2.1 秀丽隐杆线虫的生活发育史 | 第15-16页 |
| 2.2 成熟线虫的结构与染色体构成 | 第16-18页 |
| 2.3 秀丽隐杆线虫的RNAi方法 | 第18-19页 |
| 2.4 RNA干扰机制 | 第19-21页 |
| 材料和方法 | 第21-34页 |
| 实验材料、试剂和仪器 | 第21-25页 |
| 3.1 实验材料 | 第21页 |
| 3.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 3.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 3.4 溶液配制 | 第23-25页 |
| 实验方法 | 第25-34页 |
| 4.1 获取目的基因方法 | 第26页 |
| 4.2. 提取C.elegans总RNA | 第26-27页 |
| 4.3 Rad6基因的反转录和扩增 | 第27-29页 |
| 4.3.1 C.elegans mRNA的反转录 | 第27页 |
| 4.3.2. 目的基因片段的扩增 | 第27-28页 |
| 4.3.3. 琼脂糖电泳凝胶回收 | 第28-29页 |
| 4.4. 克隆载体的构建和测定 | 第29-31页 |
| 4.4.1 pUC57载体与RAD6片段的连接 | 第29-30页 |
| 4.4.2 质粒提取步骤 | 第30-31页 |
| 4.5 回收目的载体 | 第31-32页 |
| 4.6 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 4.7 连接产物转化E.coli DH5α,LB+AMP筛选 | 第32页 |
| 4.8 表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 4.8.1 从质粒pUC57-T-RAD6上获取目的基因 | 第32-33页 |
| 4.8.2 表达载体的双酶切 | 第33页 |
| 4.8.3 外源性基因和表达载体的连接 | 第33页 |
| 4.9 纯化目的DNA和质粒 | 第33页 |
| 4.10 E.coli HT115 (DE3)感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 实验设计 | 第34-40页 |
| RNAi总体实验流程 | 第34-35页 |
| RNAi -UBC-1线虫对紫外线敏感性的影响 | 第35-40页 |
| 5.1 秀丽隐杆线虫同步化: | 第35页 |
| 5.2 秀丽隐杆线虫对不同剂量紫外线的敏感性 | 第35-36页 |
| 5.3 UBC-1对线虫寿命的影响 | 第36页 |
| 5.4 UBC-1对线虫产卵(Egg-laying)孵化率的影响 | 第36-37页 |
| 5.5 UBC-1对线虫头部运动和咽部吞咽功能的影响 | 第37页 |
| 5.6 UBC-1线虫RNAi效果在蛋白水平的检测 | 第37-38页 |
| 5.7 总RNA反转录和扩增 | 第38-40页 |
| 5.7.1 C.elegans RNA的反转录 | 第38页 |
| 5.7.2 目的基因片段的扩增 | 第38-39页 |
| 5.7.3 所用引物序列表 | 第39-40页 |
| 结果 | 第40-51页 |
| 6.1 目的基因的构建和克隆载体的构建 | 第40-41页 |
| 6.2. UBC-1基因的测序鉴定 | 第41页 |
| 6.3. 重组干扰质粒的构建 | 第41页 |
| 6.4. 阳性克隆的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 6.5. RNAi干扰UBC_1对线虫生长发育的影响 | 第42-43页 |
| 6.6. 紫外线对UBC-1基因突变秀丽隐杆线虫致死率的影响 | 第43-44页 |
| 6.7 紫外线对UBC-1基因突变秀丽隐杆线虫生命周期的曲影响 | 第44-45页 |
| 6.8 紫外线对RNAi UBC-1干扰线虫孵化率的影响 | 第45-47页 |
| 6.9 UBC-1干扰对线虫运动能力的影响 | 第47页 |
| 6.10 生殖系统中UV照射后死亡情况 | 第47-48页 |
| 6.11 UBC-1基因干扰后部分mRNA的表达情况 | 第48-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 在学期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
