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Azinomycin B生物合成基因簇中orf1和orf3基因功能的初步研究

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Azinomycin B生物合成基因簇中orf1和orf3基因功能的初步研究
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-9页
缩略语第9-10页
第一章 前言第10-22页
  1.1 链霉菌自抗性机制的研究进展第10-12页
  1.2 抗肿瘤抗生素azinomycin B的研究进展第12-19页
    1.2.1 azinomycin B的作用机制第13-15页
    1.2.2 azinomycin B生物合成的研究第15-19页
    1.2.3 azinomycin B抗性机制的研究第19页
  1.3 本研究的目的与意义第19-22页
第二章 材料与方法第22-39页
  2.1 实验材料第22-31页
    2.1.1 菌株第22页
    2.1.2 质粒第22页
    2.1.3 引物第22-26页
    2.1.4 培养基第26-27页
    2.1.5 生化试剂第27-30页
    2.1.6 主要仪器设备第30-31页
  2.2 实验方法第31-39页
    2.2.1 链霉菌的培养及菌种保藏第31页
    2.2.2 链霉菌总DNA的提取——醋酸钾法第31-32页
    2.2.3 聚合酶链式反应(PCR)第32页
    2.2.4 DNA片段凝胶回收(Axygen DNA凝胶回收试剂盒)第32-33页
    2.2.5 连接反应第33页
    2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备第33页
    2.2.7 DNA转化第33-34页
    2.2.8 大肠杆菌质粒的小量提取第34页
    2.2.9 大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移第34页
    2.2.10 S.sahachiroi菌株固体发酵及发酵产物的HPLC检测第34-35页
    2.2.11 发酵产物的生物活性分析第35页
    2.2.12 目的蛋白的表达与纯化第35-36页
    2.2.13 电泳迁移实验(EMSA)第36页
    2.2.14 链霉菌RNA的提取第36-37页
    2.2.15 cDNA的合成(Roche Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit)第37页
    2.2.16 SYBR GreenI实时定量PCR(Roche FastStart Universal SYBR Green Master (ROX))第37-39页
第三章 结果与分析第39-66页
  3.1 orf1-orf6基因同框缺失质粒的构建及检测第39-43页
  3.2 同框缺失突变菌株的筛选和验证第43-45页
  3.3 同框缺失菌株的生物活性检测及HPLC分析第45-47页
  3.4 回补突变菌株的构建第47-52页
  3.5 基因orf1和orf3的异源表达第52-55页
  3.6 基因orf1和orf3在S.sahachiroi的加倍表达第55-56页
  3.7 Orf1和Orf3蛋白的表达和纯化第56-60页
  3.8 Orf1蛋白与DNA的相互作用第60-62页
  3.9 产生菌中orf1基因表达水平的分析第62-66页
第四章 讨论第66-67页
参考文献第67-70页
致谢第70-71页

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