论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 辅酶NADPH及其再生方法 | 第12-16页 |
| 1.1.1 NADPH概述 | 第12页 |
| 1.1.2 辅酶NADPH再生方法 | 第12-15页 |
| 1.1.3 辅酶NADPH代谢调控 | 第15-16页 |
| 1.2 辅酶再生在生物催化过程中的应用研究 | 第16-18页 |
| 1.3 铁氧还蛋白-NADP~+还原酶及其对辅酶NADPH再生的意义 | 第18-19页 |
| 1.4 微藻在不对称还原反应中的应用 | 第19-20页 |
| 1.5 集胞藻PCC6803内基因表达平台的构建及其应用 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题主要研究的内容及其思路 | 第21-23页 |
| 第2章 FNR重组质粒pKW-Ω-PpetE-petH的构建 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株（藻株）和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 构建重组质粒pKW-Ω-PpetE-petH的技术路线 | 第24-25页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.4 CaCl_2感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.5 集胞藻DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 重组质粒pHB1524-petH的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.7 重组质粒pKW-Ω-PpetE-petH的构建 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-35页 |
| 2.3.1 质粒pHB1524-petH的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.2 重组质粒pHB1524-petH的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 质粒pKW-Ω-Ppet E-petH的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.4 质粒pKW-Ω-Ppet E-petH的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.5 讨论 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 铜离子诱导FNR过量表达的集胞藻PCC6803::Ω-PpetE-petH的构建 | 第36-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌株（藻株）和质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 培养基 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 质粒的提取 | 第37页 |
| 3.2.2 集胞藻PCC6803的转化 | 第37-38页 |
| 3.2.3 集胞藻DNA提取 | 第38页 |
| 3.2.4 PCR检测Ω-PpetE-petH片段整合到集胞藻基因组中 | 第38-39页 |
| 3.2.5 绘制集胞藻生长曲线 | 第39页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE确认FNR蛋白表达量 | 第39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 3.3.1 集胞藻PCC6803转化 | 第39-40页 |
| 3.3.2 PCR鉴定Ω-PpetE-petH片段在集胞藻基因组的整合 | 第40-41页 |
| 3.3.3 集胞藻生长曲线 | 第41-43页 |
| 3.3.4 铜离子诱导FNR过量表达 | 第43-44页 |
| 3.3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第4章 集胞藻::Ω-PpetE-petH辅酶再生强化及其在催化前手性羰基化合物不对称还原中的应用 | 第46-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 实验藻株 | 第46页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.3 培养基 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 藻种培养 | 第47页 |
| 4.2.2 藻体培养 | 第47页 |
| 4.2.3 NADPH浓度检测 | 第47-48页 |
| 4.2.4 FNR酶活检测 | 第48-49页 |
| 4.2.5 集胞藻催化苯乙酮不对称还原生成手性醇 | 第49-51页 |
| 4.2.6 集胞藻催化乙酰乙酸乙酯不对称还原生成手性3-羟基丁酸乙酯 | 第51-52页 |
| 4.2.7 内标法计算还原反应的产率和对映体过量值 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 4.3.1 NADPH含量检测结果 | 第52-53页 |
| 4.3.2 FNR酶活检测结果 | 第53-54页 |
| 4.3.3 集胞藻催化苯乙酮不对称还原反应 | 第54-56页 |
| 4.3.4 集胞藻催化乙酰乙酸乙酯不对称还原反应 | 第56页 |
| 4.3.5 讨论 | 第56-57页 |
| 4.4 小结 | 第57-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 展望和建议 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第72页 |
