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中华水蛇PLIγ在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定
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中华水蛇PLIγ在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
中英文缩略词表第11-12页
第1章 引言第12-16页
　　1.1 sPLA_2是蛇毒关键毒素组分第12-14页
　　1.2 sPLA_2特异性蛇源抑制剂第14页
　　1.3 本文研究意义第14-16页
第2章 中华水蛇血清PLIγ 的广谱抗蛇毒作用第16-25页
　　2.1 实验材料及仪器第16-17页
　　　　2.1.1 材料第16页
　　　　2.1.2 试剂第16页
　　　　2.1.3 实验仪器第16-17页
　　　　2.1.4 主要溶液的配置第17页
　　2.2 实验方法第17-19页
　　　　2.2.1 蛇毒和中华水蛇血清蛋白定量第17-18页
　　　　2.2.2 琼脂糖平板测定蛋白活性第18页
　　　　2.2.3 中华水蛇PLIγ 抑制蛇毒出血毒第18-19页
　　2.3 实验结果第19-23页
　　　　2.3.1 BCA蛋白定量第19页
　　　　2.3.2 琼脂糖活性平板实验第19-21页
　　　　2.3.3 小鼠出血毒实验第21-23页
　　2.4 讨论第23-25页
第3章 酵母表达质粒pPICZαA-PLIγ 的构建第25-36页
　　3.1 实验材料第26-27页
　　　　3.1.1 菌株和质粒第26页
　　　　3.1.2 引物第26页
　　　　3.1.3 主要试剂第26页
　　　　3.1.4 主要仪器和设备第26-27页
　　　　3.1.5 溶液配制第27页
　　3.2 实验方法第27-32页
　　　　3.2.1 pET28c(+)-PLIγ 质粒的制备第27-28页
　　　　3.2.2 中华水蛇PLIγ 基因克隆第28-30页
　　　　3.2.3 构建重组质粒pPICZαA-PLIγ第30-31页
　　　　3.2.4 重组质粒转化第31-32页
　　　　3.2.5 重组质粒的鉴定第32页
　　　　3.2.6 DNA测序第32页
　　3.3 结果第32-35页
　　　　3.3.1 PLIγ 基因的扩增第32-33页
　　　　3.3.2 重组质粒pPICZαA-PLIγ 双酶切与PCR鉴定第33-34页
　　　　3.3.3 重组质粒的测序结果第34-35页
　　3.4 讨论第35-36页
第4章 中华水蛇PLIγ 诱导表达、纯化及活性检测第36-53页
　　4.1 实验材料第36-40页
　　　　4.1.1 菌株第36页
　　　　4.1.2 主要试剂第36-37页
　　　　4.1.3 主要仪器第37页
　　　　4.1.4 溶液的配置第37-40页
　　4.2 实验方法第40-46页
　　　　4.2.1 重组质粒转化毕赤酵母GS115第40-41页
　　　　4.2.2 酵母表达重组子筛选第41-42页
　　　　4.2.3 酵母阳性克隆诱导表达第42页
　　　　4.2.4 酵母表达产物检测第42-44页
　　　　4.2.5 蛋白的分离纯化第44-45页
　　　　4.2.6 琼脂糖平板测定蛋白活性第45-46页
　　　　4.2.7 PLIγ 抗五步蛇毒致小鼠出血毒性的测定第46页
　　4.3 结果第46-51页
　　　　4.3.1 重组质粒的线性化第46-47页
　　　　4.3.2 重组酵母基因组DNA的提取第47页
　　　　4.3.3 重组酵母的PCR鉴定第47-48页
　　　　4.3.4 western bolt结果第48页
　　　　4.3.5 亲和层析纯化PLIγ第48-49页
　　　　4.3.6 琼脂糖平板测定蛋白活性第49-50页
　　　　4.3.7 PLIγ 抗五步蛇毒出血毒作用第50-51页
　　4.4 讨论第51-53页
第5章 结论与展望第53-54页
　　5.1 结论第53页
　　5.2 进一步的研究计划第53-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-60页
攻读学位期间的研究成果第60-61页
综述第61-70页
参考文献第67-70页

本篇论文共70页，点击这进入下载页面。
 
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中华水蛇PLIγ在毕赤酵母中的表达、
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