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抗氧化转录因子NRF2在不同环境中过表达对细胞命运的影响

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抗氧化转录因子NRF2在不同环境中过表达对细胞命运的影响
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-11页
英文缩略词第11-13页
第一部分 绪论第13-24页
  1.1 前言第13-14页
  1.2 NRF2-Keap1-ARE信号通路介绍第14-17页
    1.2.1 NRF2的基本结构与功能第14页
    1.2.2 Keap1基本结构与功能第14-15页
    1.2.3 NRF2-Keap1-ARE信号通路激活机制第15-17页
  1.3 NRF2的作用第17-22页
    1.3.1 NRF2下游的基因第17-19页
    1.3.2 NRF2在肿瘤中的双面作用第19-20页
    1.3.3 NRF2与细胞代谢第20-22页
    1.3.4 NRF2与细胞凋亡和自噬相关的研究第22页
  1.4 氧化应激与ROS第22-24页
第二部分 实验材料与实验方法第24-35页
  2.1 溶液配制第24-25页
  2.2 实验方法第25-35页
    2.2.1 细胞培养第25页
    2.2.2 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离与冻存第25-26页
    2.2.3 质粒DNA的小量提取第26-27页
    2.2.4 细胞转染第27页
    2.2.5 在HEK-293T中包装慢病毒第27-29页
    2.2.6 慢病毒感染第29页
    2.2.7 细胞总蛋白质的提取第29页
    2.2.8 蛋白样品浓度测定第29-30页
    2.2.9 细胞内活性氧(ROS)检测第30页
    2.2.10 线粒体内活性氧(ROS)检测第30-31页
    2.2.11 线粒体膜电位检测第31页
    2.2.12 免疫荧光第31-32页
    2.2.13 免疫印迹Western Blot第32页
    2.2.14 细胞总RNA的提取第32-33页
    2.2.15 特异性反转录第33-34页
    2.2.16 RT-PCR第34-35页
第三部分 实验结果与讨论第35-52页
  3.1 利用慢病毒过表达系统筛选影响MEF细胞命运的基因第35-37页
  3.2 NRF2过表达对MEF细胞的作用第37-42页
    3.2.1 MEF细胞体外培养中NRF2表达的情况第37-38页
    3.2.2 构建稳定高表达的NRF2突变体第38-39页
    3.2.3 过表达NRF2突变体影响MEF细胞生长第39-41页
    3.2.4 MEF细胞中敲降Keap1影响细胞的生长第41-42页
  3.3 MEF传代早期过表达NRF2突变体会影响细胞增殖和衰老第42-44页
  3.4 NRF2突变体过表达促进永生化MEF细胞的生长第44-46页
  3.5 MEF传代早期过表达NRF2突变体降低细胞ROS和线粒体膜电位水平第46-48页
  3.6 FOXO3拮抗NRF2过表达对MEF细胞的作用第48-50页
  3.7 总结讨论第50-52页
参考文献第52-60页
致谢第60-61页

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