红曲霉酸性蛋白酶基因的同源表达及液态发酵条件优化研究

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红曲霉酸性蛋白酶基因的同源表达及液态发酵条件优化研究

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红曲霉酸性蛋白酶基因的同源表达及液态发酵条件优化研究

论文目录
中文摘要	第1-4页
英文摘要	第4-9页
缩略词	第9-10页
1 绪论	第10-18页
1.1 红曲霉概述	第10页
1.2 红曲霉的形态与结构	第10-11页
1.3 红曲霉的重要代谢特性及产物	第11页
1.4 酸性蛋白酶的应用	第11-12页
1.5 真菌酸性蛋白酶的酶学特性	第12-14页
1.5.1 酸性蛋白酶的基本酶学特性	第12-13页
1.5.2 国内外酸性蛋白酶研究现状	第13页
1.5.3 影响酸性蛋白酶产量的因素	第13-14页
1.6 丝状真菌遗传转化系统研究	第14-16页
1.6.1 丝状真菌的遗传转化方法	第14-15页
1.6.2 丝状真菌的强启动子	第15-16页
1.7 微生物发酵条件优化研究现状	第16页
1.8 本研究的内容和目的	第16-18页
1.8.1 本课题的研究目的	第16页
1.8.2 本课题的研究内容	第16-17页
1.8.3 技术路线	第17-18页
2 红曲霉酸性蛋白酶基因的序列特征及环境胁迫性研究	第18-38页
2.1 引言	第18页
2.2 实验材料及仪器	第18-20页
2.2.1 实验菌株	第18页
2.2.2 工具软件	第18-19页
2.2.3 主要试剂、配方及设备	第19-20页
2.3 实验方法	第20-24页
2.3.1 红曲霉Asp的克隆	第20-23页
2.3.2 Asp生物信息学分析	第23页
2.3.3 Asp环境胁迫性研究	第23-24页
2.4 结果与讨论	第24-36页
2.4.1 Asp的克隆	第24-25页
2.4.2 家族和开放阅读框检验	第25页
2.4.3 红曲霉酸性蛋白酶基因Asp蛋白预测分析	第25-28页
2.4.4 信号肽预测	第28-29页
2.4.5 亲疏水性分析	第29页
2.4.6 跨膜结构域预测	第29-30页
2.4.7 激酶磷酸化修饰位点预测	第30-31页
2.4.8 功能位点预测	第31页
2.4.9 进化树构建	第31-32页
2.4.10 分子钟假说检验	第32-33页
2.4.11 Asp胁迫性分析	第33-36页
2.5 本章小结	第36-38页
3 Asp基因的同源表达研究	第38-54页
3.1 引言	第38页
3.2 实验材料及仪器	第38-40页
3.2.1 载体及菌株	第38页
3.2.2 主要试剂和配制	第38-40页
3.2.3 主要实验仪器	第40页
3.3 实验方法	第40-46页
3.3.1 重组载体的构建	第40-43页
3.3.2 根癌农杆菌介导转化红曲霉实验	第43-45页
3.3.3 转化子的性能分析	第45-46页
3.4 结果与讨论	第46-52页
3.4.1 重组载体的构建	第46-48页
3.4.2 红曲霉转化子菌株的获得	第48-49页
3.4.3 红曲霉转化株酸性蛋白酶合成特性	第49-51页
3.4.4 转化子传代实验	第51-52页
3.5 本章小结	第52-54页
4 红曲霉酸性蛋白酶合成的液态发酵条件优化	第54-70页
4.1 引言	第54-55页
4.2 实验材料及仪器	第55-56页
4.2.1 主要试剂及配制	第55-56页
4.2.2 主要仪器	第56页
4.3 实验方法	第56-60页
4.3.1 制作酪氨酸浓度标准曲线	第56页
4.3.2 单因素变量液态发酵	第56-58页
4.3.3 响应面分析实验设计	第58-60页
4.4 结果与讨论	第60-69页
4.4.1 酪氨酸浓度标准曲线	第60页
4.4.2 培养基配方单因素变量结果	第60-65页
4.4.3 响应面分析结果	第65-68页
4.4.4 红曲霉生长曲线和酸性蛋白酶曲线	第68-69页
4.5 本章小结	第69-70页
5 结论	第70-72页
6 后续工作展望	第72-74页
致谢	第74-76页
参考文献	第76-82页
附录	第82-84页
A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录	第82页
B. 作者在攻读学位期间申请的专利	第82页
C. ASP基因序列及其所编码的氨基酸	第82-83页
D. 表达载体PBC-HYGRO图谱	第83页
E. HPH基因序列	第83-84页
F. 熔解曲线	第84页

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