论文目录 | |
| 缩略语 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 概述 | 第13-14页 |
| 1.2 CLA的生理功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 抗癌作用 | 第14页 |
| 1.2.2 抗动脉粥样硬化 | 第14页 |
| 1.2.3 减肥作用 | 第14-15页 |
| 1.2.4 抗氧化作用 | 第15页 |
| 1.2.5 其他功能 | 第15页 |
| 1.3 CLA的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3.1 紫外检测法 | 第15页 |
| 1.3.2 气相色谱法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 银离子高效液相色谱法 | 第16页 |
| 1.3.4 气-质联用法 | 第16页 |
| 1.4 亚油酸异构酶的来源 | 第16-18页 |
| 1.5 亚油酸异构酶的性质 | 第18-20页 |
| 1.5.1 专一性 | 第18-19页 |
| 1.5.2 底物对酶的抑制作用 | 第19页 |
| 1.5.3 pH值对酶的影响 | 第19-20页 |
| 1.5.4 温度对酶的影响 | 第20页 |
| 1.6 亚油酸异构酶基因的序列分析 | 第20-23页 |
| 1.7 亚油酸异构酶基因表达的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.7.1 原核工程菌的构建与表达 | 第23-24页 |
| 1.7.2 真核工程菌的构建和表达 | 第24页 |
| 1.8 多态性检测方法 | 第24-25页 |
| 1.8.1 RFLP（Restriction fragment length polymorphism）法 | 第24-25页 |
| 1.8.2 RAPD（Random amplified polymorphic DNA）法 | 第25页 |
| 1.8.3 AFLP（Amplication fragment length polymorphism）法 | 第25页 |
| 1.9 研究内容 | 第25-26页 |
| 1.9.1 亚油酸异构酶基因原核工程菌的构建 | 第25-26页 |
| 1.9.2 重组菌株的诱导条件优化 | 第26页 |
| 1.9.3 RFLP法分析亚油酸异构酶基因的多态性 | 第26页 |
| 1.10 研究意义 | 第26-27页 |
| 第2章 亚油酸异构酶原核工程菌的构建与表达 | 第27-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 工具酶 | 第27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 培养基 | 第28页 |
| 2.1.5 实验所用溶液 | 第28-29页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.7 分析工具 | 第30页 |
| 2.1.8 引物 | 第30-31页 |
| 2.2 方法 | 第31-37页 |
| 2.2.1 菌株活化 | 第31页 |
| 2.2.2 亚油酸异构酶基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.3 DH5α和BL21感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.4 克隆载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.5 重组质粒（pUCm-T-LAI）转化至DH5α | 第34页 |
| 2.2.6 重组质粒（pUCm-T-LAI）的检测 | 第34-35页 |
| 2.2.7 重组表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.8 BL21（pET- DsbA-LAI）重组菌株的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE检测诱导表达 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-49页 |
| 2.3.1 植物乳杆菌和干酪乳杆菌基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.3.2 PCR扩增LAI基因 | 第38-40页 |
| 2.3.3 重组克隆载体的鉴定 | 第40-42页 |
| 2.3.4 亚油酸异构酶基因序列 | 第42-44页 |
| 2.3.5 重组表达载体的鉴定 | 第44-47页 |
| 2.3.6 BL21（pET- DsbA-LAI）重组菌株的诱导表达 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第3章 重组菌株的诱导条件优化 | 第50-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 培养基 | 第50-51页 |
| 3.1.4 实验所用溶液 | 第51页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第51页 |
| 3.2 方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 重组菌株活化 | 第51-52页 |
| 3.2.2 诱导时机对重组菌株的影响 | 第52页 |
| 3.2.3 诱导剂浓度对重组菌株的影响 | 第52页 |
| 3.2.4 诱导时间对重组菌株的影响 | 第52页 |
| 3.2.5 诱导温度对重组菌株的影响 | 第52页 |
| 3.2.6 乳化油 | 第52-53页 |
| 3.2.7 粗酶液的制备 | 第53页 |
| 3.2.8 酶活的测定 | 第53页 |
| 3.2.9 CLA的测定 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 3.3.1 诱导时机对重组菌株的影响 | 第53-55页 |
| 3.3.2 诱导剂浓度对重组菌株的影响 | 第55页 |
| 3.3.3 诱导时间对重组菌株的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4 诱导温度对重组菌株的影响 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第4章 亚油酸异构酶基因的多态性分析 | 第59-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-62页 |
| 4.1.1 菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 工具酶 | 第59页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.4 培养基 | 第59-60页 |
| 4.1.5 实验所用溶液 | 第60页 |
| 4.1.6 仪器设备 | 第60-61页 |
| 4.1.7 分析工具 | 第61页 |
| 4.1.8 引物 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 菌株活化 | 第62页 |
| 4.2.2 植物乳杆菌和干酪乳杆菌基因组的提取 | 第62页 |
| 4.2.3 PCR扩增LAI基因 | 第62-63页 |
| 4.2.4 PCR产物纯化 | 第63页 |
| 4.2.5 基因序列分析 | 第63-64页 |
| 4.2.6 PCR-RFLP | 第64-65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 4.3.1 PCR扩增LAI基因 | 第65页 |
| 4.3.2 基因序列分析 | 第65-67页 |
| 4.3.3 PCR-RFLP | 第67-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录A | 第82-84页 |
| 附录B | 第84-86页 |
| 附录C | 第86-88页 |
| 附录D | 第88-90页 |
| 附录E | 第90-91页 |
| 附录F | 第91-92页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第92页 |
