论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 蛋白质相互作用研究方法介绍 | 第11-15页 |
| 1.2.1 酵母双杂交 | 第12页 |
| 1.2.2 融合蛋白沉降技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3 免疫共沉淀 | 第13页 |
| 1.2.4 噬菌体的展示技术(PDT) | 第13页 |
| 1.2.5 融合蛋白亲和色谱法 | 第13-14页 |
| 1.2.6 表面等离子共振(SRP) | 第14页 |
| 1.2.7 蛋白芯片技术 | 第14页 |
| 1.2.8 荧光共振的能量转移(FRET) | 第14-15页 |
| 1.3 转录因子FOXA1蛋白简介 | 第15-17页 |
| 1.3.1 FOXA1基因与蛋白结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 转录因子FOXA1在生物学中的功能 | 第16-17页 |
| 1.4 本文构思 | 第17-18页 |
| 第2章 FOXA1重组质粒的构建及其鉴定 | 第18-30页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第18-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.3.1 细胞株培养、冻存和复苏 | 第21-22页 |
| 2.3.2 RT-PCR克隆人FOXA1基因 | 第22-23页 |
| 2.3.3 酶切、纯化、连接及转化 | 第23-25页 |
| 2.3.4 连接产物的转化 | 第25页 |
| 2.3.5 pGEX-4T-1-FOXA1质粒小提及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.6 克隆人的FOXA1-C/FOXA1-N/FOXA1-DBD | 第26页 |
| 2.3.7 构建FOXA1在原核表达载体pGEX-4T-1中的重组表达质粒 | 第26-27页 |
| 2.4 结果及讨论 | 第27-29页 |
| 2.4.1 目的产物hFOXA1的PCR电泳图 | 第27页 |
| 2.4.2 pGEX-4T-1-FOXA1重组质粒的酶切电泳图 | 第27-28页 |
| 2.4.3 目的产物hFOXA1的分段克隆 | 第28-29页 |
| 2.4.4 讨论 | 第29页 |
| 2.5 实验结论 | 第29-30页 |
| 第3章 人FOXA1结构域蛋白的表达及纯化 | 第30-38页 |
| 3.1 前言 | 第30-31页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.3.1 FOXA1重组表达质粒的转化 | 第32页 |
| 3.3.2 FOXA1分段蛋白FOXA1-C与FOXA1-N与GST蛋白的诱导表达及纯化 | 第32-33页 |
| 3.3.3 蛋白表达条件的摸索 | 第33页 |
| 3.3.4 Western Blot纯化蛋白的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.5 目的蛋白的纯化及SDS-PAGE考染对融合蛋白进行鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第35-37页 |
| 3.4.1 GST-FOXA-C及GST-FOXA1-N融合蛋白的表达及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4.2 GST-FOXA-C与GST-FOXA1-N融合蛋白的纯化 | 第36页 |
| 3.4.3 讨论 | 第36-37页 |
| 3.5 结论 | 第37-38页 |
| 第4章 FOXA1互作蛋白的分析及鉴定 | 第38-45页 |
| 4.1 前言 | 第38-39页 |
| 4.2 实验仪器与试剂 | 第39页 |
| 4.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 4.3.1 制备高表达TLE3的乳腺癌MCF7细胞株 | 第39-40页 |
| 4.3.2 GST Pull Down | 第40页 |
| 4.3.3 Western Blot鉴定GST Pull Down结果 | 第40-42页 |
| 4.3.4 考马斯亮蓝实验验证Pull Down结果 | 第42页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第42-44页 |
| 4.4.1 GST Pull Down结果的Western Blot验证实验 | 第42-43页 |
| 4.4.2 GST-FOXA1-C的GST Pull Down实验的考染结果 | 第43-44页 |
| 4.4.3 讨论 | 第44页 |
| 4.5 实验结论 | 第44-45页 |
| 总结与展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第51-52页 |
| 附录B 生物素标记转录因子FOXA1 | 第52-59页 |
| 附录C 英文缩写 | 第59-60页 |
| 附录D 常用缓冲液和试剂配方 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
