论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 嵌入式荧光探针 | 第10-11页 |
| 1.1.1 吖啶、菲啶类染料 | 第10页 |
| 1.1.2 菁类染料 | 第10-11页 |
| 1.1.3 SYBR GREEN Ⅰ | 第11页 |
| 1.2 共价标记式探针 | 第11-12页 |
| 1.2.1 花菁染料 | 第11-12页 |
| 1.2.2 荧光素类染料 | 第12页 |
| 1.2.3 罗丹明类染料 | 第12页 |
| 1.3 二元探针 | 第12-14页 |
| 1.3.1 荧光共振能量转移FRET | 第12-14页 |
| 1.4 分子信标 | 第14页 |
| 1.5 其他探针 | 第14-16页 |
| 1.5.1 量子点荧光（Qdot） | 第14-15页 |
| 1.5.2 稀土探针 | 第15-16页 |
| 1.6 蛋白连接系统 | 第16-17页 |
| 1.6.1 生物素（Biotin） | 第16页 |
| 1.6.2 生物素-亲和素系统 | 第16-17页 |
| 1.6.3 链霉亲和素（Streptavidin） | 第17页 |
| 1.7 显微成像技术 | 第17-20页 |
| 1.7.1 激光共聚焦显微技术及其原理 | 第17-18页 |
| 1.7.2 激光共聚焦显微技术在生物学及医学上的应用 | 第18-19页 |
| 1.7.3 环境扫描显微技术 | 第19-20页 |
| 第2章 DNA探针的制备与鉴定 | 第20-36页 |
| 2.1 材料与设备 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要实验设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 HUVECs细胞培养方法 | 第22-24页 |
| 2.2.2 细胞基因组提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 RNA完整性检测 | 第26页 |
| 2.2.5 RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.2.6 大肠杆菌的培养 | 第27页 |
| 2.2.7 引物设计和PCR反应体系 | 第27-28页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.2.9 电泳迁移分析（EMSA） | 第29页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-34页 |
| 2.3.1 不同长度的DNA探针的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 质谱检验DNA探针的 5’端连接的Biotin基团 | 第30-32页 |
| 2.3.3 EMSA(电泳迁移实验）检验 150bp DNA探针的 5’端连接的Biotin基团 | 第32-33页 |
| 2.3.4 EMSA(电泳迁移实验）检验 1500bp DNA探针的 5’端连接的Biotin基团 | 第33-34页 |
| 2.3.5 EMSA(电泳迁移实验）检验 3500bp DNA探针的 5’端连接的Biotin基团 | 第34页 |
| 2.4 总结 | 第34-36页 |
| 第3章 DNA探针的初步应用 | 第36-57页 |
| 3.1 材料与设备 | 第36-38页 |
| 3.1.1 主要实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.2 主要实验设备 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 3.2.1 巨噬细胞的获取 | 第38-39页 |
| 3.2.2 红细胞的分离提取 | 第39-40页 |
| 3.2.3 用激光共聚焦成像检测硅珠大小 | 第40页 |
| 3.2.4 用环境扫描电镜检测硅珠大小 | 第40页 |
| 3.2.5 用激光共聚焦成像检测染料探针在硅珠上的染色效果 | 第40-41页 |
| 3.2.6 用激光共聚焦成像检测ROX探针在硅珠上的染色效果 | 第41页 |
| 3.2.7 用流式细胞术检测染料探针在硅珠上的染色效果 | 第41-42页 |
| 3.2.8 用激光共聚焦成像检测染料探针在红细胞中的染色效果 | 第42-43页 |
| 3.2.9 用激光共聚焦成像检测ROX探针在红细胞中的染色效果 | 第43页 |
| 3.2.10 用激光共聚焦成像检测ROX探针在内皮细胞中的染色效果 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-55页 |
| 3.3.1 利用激光共聚焦显微镜对包被Streptavidin的硅珠进行检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 利用环境扫描电镜对包被Streptavidin的硅珠进行检测 | 第45-46页 |
| 3.3.3 利用流式细胞术对包被Streptavidin的硅珠大小进行检测 | 第46-47页 |
| 3.3.4 流式细胞术检测不同浓度的探针的平均荧光强度 | 第47-48页 |
| 3.3.5 利用包被Streptavidin的硅珠对DNA探针进行荧光检测 | 第48-49页 |
| 3.3.6 利用无核的兔红细胞对DNA探针进行荧光检测 | 第49-50页 |
| 3.3.7 利用无核的人红细胞对DNA探针进行荧光检测 | 第50-51页 |
| 3.3.8 利用包被Streptavidin的硅珠对DNA-ROX探针进行荧光检测 | 第51-52页 |
| 3.3.9 利用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对DNA-ROX探针进行荧光检测 | 第52-53页 |
| 3.3.10 利用THP-1 转化的巨噬细胞（Macrophage）对DNA-ROX探针进行荧光检测 | 第53-54页 |
| 3.3.11 利用特异性的抗体对DNA-ROX探针进行荧光检测 | 第54-55页 |
| 3.4 总结 | 第55-57页 |
| 第4章 总结与建议 | 第57-59页 |
| 4.1 总结 | 第57-58页 |
| 4.2 建议 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
