论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 组蛋白去乙酰化的表观遗传学基础 | 第12-13页 |
| 1.1.1 染色质的结构和分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 参与染色质构型改变的机制 | 第13页 |
| 1.2 组蛋白去乙酰化酶基因的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 组蛋白去乙酰化作用位点 | 第13-14页 |
| 1.2.2 组蛋白去乙酰化酶的作用方式 | 第14页 |
| 1.2.3 组蛋白去乙酰化酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.4 组蛋白去乙酰化酶的功能 | 第15-17页 |
| 1.3 课题的提出及研究意义 | 第17-19页 |
| 1.4 课题的研究目的及主要研究内容 | 第19-22页 |
| 1.4.1 课题的研究目的 | 第19页 |
| 1.4.2 课题研究的主要内容 | 第19页 |
| 1.4.3 课题研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 1.4.4 课题的创新点 | 第20-22页 |
| 2 番茄SlHDA5基因的生物信息学分析 | 第22-26页 |
| 2.1 材料及方法 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.2.1 番茄中HDACS的分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2 SlHDA5的氨基酸序列比对 | 第24-25页 |
| 2.2.3 SlHDA5的系统进化分析 | 第25-26页 |
| 3 SlHDA5基因的组织表达模式研究 | 第26-38页 |
| 3.1 材料、仪器与试剂 | 第26-31页 |
| 3.1.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第26-27页 |
| 3.1.3 试剂与培养基 | 第27-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 番茄材料的收集 | 第31-32页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.3 cDNA的合成 | 第33页 |
| 3.3 SlHDA5表达模式分析 | 第33-35页 |
| 3.3.1 SlHDA5基因定量引物设计及扩增条件探索 | 第33-35页 |
| 3.3.2 SlHDA5表达模式分析 | 第35页 |
| 3.4 结果与分析 | 第35-36页 |
| 3.4.1 SlHDA5基因在番茄不同组织和器官中的表达模式 | 第35-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-38页 |
| 4 SlHDA5基因沉默载体构建及转基因番茄的培育 | 第38-68页 |
| 4.1 材料、仪器与试剂 | 第38页 |
| 4.1.1 材料 | 第38页 |
| 4.1.2 仪器与设备 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-54页 |
| 4.2.1 设计SlHDA5基因沉默片段扩增引物 | 第38-39页 |
| 4.2.2 PCR扩增目的基因沉默片段 | 第39页 |
| 4.2.3 PCR产物进行纯化 | 第39-40页 |
| 4.2.4 SlHDA5基因沉默片段的PCR产物加A尾 | 第40-41页 |
| 4.2.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第41页 |
| 4.2.6 转化大肠杆菌 | 第41页 |
| 4.2.7 菌落PCR验证 | 第41-44页 |
| 4.2.8 SlHDA5基因正向片段的插入 | 第44-46页 |
| 4.2.9 SlHDA5基因反向片段的插入 | 第46-48页 |
| 4.2.10 SlHDA5-pBIN19沉默载体终载体的构建 | 第48-51页 |
| 4.2.11 野生型番茄AC++种子消毒 | 第51页 |
| 4.2.12 农杆菌侵染转化番茄子叶外植体 | 第51-52页 |
| 4.2.13 转基因番茄的抗性筛选 | 第52-53页 |
| 4.2.14 转基因阳性番茄苗筛选 | 第53-54页 |
| 4.2.15 阳性转基因番茄沉默效率鉴定 | 第54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-66页 |
| 4.3.1 目的基因SlHDA5沉默片段的克隆 | 第55页 |
| 4.3.2 SlHDA5基因沉默片段连接pMD18-T载体 | 第55-57页 |
| 4.3.3 cmSlHDA5 -pHANNIBAL-cmSlHDA5沉默中间载体的构建 | 第57-60页 |
| 4.3.4 SlHDA5-pBIN19沉默载体的构建 | 第60-64页 |
| 4.3.5 农杆菌介导番茄的转化以及培育转基因番茄 | 第64页 |
| 4.3.6 PCR筛选转基因阳性番茄苗 | 第64-65页 |
| 4.3.7 SlHDA5基因在阳性转基因番茄中的表达分析 | 第65-66页 |
| 4.4 小结 | 第66-68页 |
| 5 SlHDA5基因功能分析 | 第68-78页 |
| 5.1 材料 | 第68页 |
| 5.2 方法 | 第68-71页 |
| 5.2.1 野生型番茄幼苗的激素胁迫处理 | 第68页 |
| 5.2.2 野生型番茄幼苗的非生物胁迫处理 | 第68-69页 |
| 5.2.3 转基因番茄T1代幼苗干旱抗性实验 | 第69-70页 |
| 5.2.4 转基因番茄T1代幼苗盐抗性实验 | 第70页 |
| 5.2.5 转基因番茄T1代幼苗对盐的敏感性实验 | 第70-71页 |
| 5.2.6 转基因番茄T1代幼苗对ABA的敏感性实验 | 第71页 |
| 5.3 结果与分析 | 第71-78页 |
| 5.3.1 激素及非生物胁迫处理分析 | 第71-73页 |
| 5.3.2 转基因番茄T1代幼苗干旱抗性分析 | 第73-74页 |
| 5.3.3 转基因番茄T1代幼苗盐抗性分析 | 第74-75页 |
| 5.3.4 转基因番茄T1代幼苗NaCl敏感性 | 第75-76页 |
| 5.3.5 转基因番茄T1代幼苗ABA敏感性 | 第76-78页 |
| 6 讨论 | 第78-80页 |
| 7 结论与展望 | 第80-82页 |
| 7.1 主要结论 | 第80页 |
| 7.2 后续工作展望 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 附录 | 第92页 |
| A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文及专利目录 | 第92页 |
| B. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第92页 |
