论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 DNA甲基化的研究 | 第9-15页 |
| 1.1.1 DNA甲基化概述 | 第9-11页 |
| 1.1.2 DNA甲基化研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2 LncRNA的概述和研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 ncRNA介导DNA甲基化研究 | 第17-20页 |
| 第2章 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1 实验设备和试剂耗材 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验主要设备及器材 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试剂耗材 | 第21-22页 |
| 2.2 抗体信息 | 第22页 |
| 2.3 引物信息 | 第22-23页 |
| 2.4 细胞来源 | 第23-24页 |
| 第3章 实验方法 | 第24-41页 |
| 3.1 Dnmt3a，Dnmt3b，Dnmt1基因序列信息获得 | 第24-25页 |
| 3.2 H9-ESC细胞复苏 | 第25-27页 |
| 3.2.1 用metrigel包被细胞培养皿（扣板） | 第25页 |
| 3.2.2 Complete TESRTM-E8配制 | 第25-26页 |
| 3.2.3 复苏ES-H9细胞 | 第26-27页 |
| 3.3 胚胎干细胞ES-H9传代 | 第27-28页 |
| 3.4 细胞冻存 | 第28-29页 |
| 3.5 ES细胞向NPC的诱导分化 | 第29-31页 |
| 3.6 NPC细胞传代 | 第31-33页 |
| 3.7 免疫荧光染色 | 第33-34页 |
| 3.8 Trizol法抽提RNA | 第34-35页 |
| 3.9 去除RNA中的基因组DNA | 第35页 |
| 3.10 酚氯仿纯化抽提RNA | 第35-36页 |
| 3.11 RT-qPCR | 第36-37页 |
| 3.12 RNA免疫沉淀 | 第37-39页 |
| 3.13 RIP-seq数据分析 | 第39-40页 |
| 3.14 转录物组装和合并软件：cufflink使用和ncRNA预测 | 第40-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-65页 |
| 4.1 ES-H9细胞系的免疫组化鉴定 | 第41-43页 |
| 4.2 ES细胞向NPC细胞分化和分化过程中Dnmts表达量检查结果 | 第43-49页 |
| 4.2.1 ES-H9细胞向NPC细胞分化及NPC细胞鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.2 ES-H9细胞向NPC分化过程中Dnmt3a和Dnmt3b的表达量变化 | 第44-49页 |
| 4.3 RNA免疫共沉淀与捕获能够和Dnmt3b结合的RNA并分析RNA的类型和数量 | 第49-55页 |
| 4.4 人ES-H9细胞分化过程中Dnmt3b在基因组中的定位 | 第55-65页 |
| 4.4.1 人ES向NPC细胞分化过程中与Dnmt3b结合的RNA在基因上的定位及其在基因组结合位点附近基因的甲基化情况 | 第57-62页 |
| 4.4.2 人细胞中Dnmt3b在基因组上结合位点附近基因的功能分析 | 第62-65页 |
| 第5章 讨论 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
