论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 课题来源 | 第10页 |
| 1.2 课题研究的背景和目的意义 | 第10-11页 |
| 1.3 黑曲霉的研究现状及应用 | 第11-15页 |
| 1.3.1 黑曲霉的简介 | 第11-12页 |
| 1.3.2 黑曲霉在产酶和产酸方面的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.3 黑曲霉在生物饲料方面的应用 | 第13-14页 |
| 1.3.4 黑曲霉在生物转化方面的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 基因敲除的国内外研究现状 | 第15-17页 |
| 1.4.1 基因敲除的概念 | 第15-16页 |
| 1.4.2 基因敲除的原理及方法 | 第16-17页 |
| 1.5 小G蛋白家族在真菌中的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.6 课题主要研究内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 第2章 实验材料及方法 | 第23-38页 |
| 2.1 实验所用材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 实验所用到的菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验所用到的引物 | 第24页 |
| 2.1.3 实验所用到的仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验所用到的药品和试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.5 实验所用到的培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 黑曲霉ras基因大片段的克隆和鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.2 黑曲霉ras基因敲除质粒pPZPtk8.10：ras：hyg的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.3 敲除质粒的真菌转化及敲除子的筛选鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.4 敲除子生长速度的测定 | 第35页 |
| 2.2.5 敲除子菌丝形态及产孢情况的观察 | 第35页 |
| 2.2.6 敲除子生物量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.7 敲除子生长温度的观测 | 第36页 |
| 2.2.8 敲除子纤维素酶酶活力的测定 | 第36-38页 |
| 第3章 敲除质粒pPZPtk8.10：ras：hyg的构建 | 第38-44页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 黑曲霉ras基因及其上下游序列的克隆和鉴定 | 第38-40页 |
| 3.2.1 黑曲霉ras基因大片段的获得 | 第38-39页 |
| 3.2.2 黑曲霉ras基因保守区域的分析及上下游同源序列长度的确定 | 第39-40页 |
| 3.3 中间重组质粒pPZPtk8.10：ras的构建 | 第40-41页 |
| 3.4 敲除质粒pPZPtk8.10：ras：hyg的构建 | 第41-43页 |
| 3.5 讨论 | 第43页 |
| 3.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 黑曲霉的真菌转化及ras基因敲除子筛选鉴定 | 第44-50页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 敲除质粒pPZPtk8.10：ras：hyg转化农杆菌 | 第44-45页 |
| 4.3 黑曲霉ras基因敲除子对潮霉素B的最小筛选浓度的确定 | 第45-46页 |
| 4.4 农杆菌与黑曲霉共培养介导的真菌转化 | 第46页 |
| 4.5 ras基因敲除子的分子生物学鉴定及其遗传稳定性的验证 | 第46-48页 |
| 4.6 讨论 | 第48-49页 |
| 4.7 本章小结 | 第49-50页 |
| 第5章 ras基因敲除子生物学特性的研究 | 第50-56页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 ras基因敲除子生长速度的测定 | 第50页 |
| 5.3 ras基因敲除子菌丝形态及产孢状况的观察 | 第50-52页 |
| 5.4 ras基因敲除子生物量的测定 | 第52页 |
| 5.5 ras基因敲除子培养温度对其影响的观察 | 第52-53页 |
| 5.6 ras基因敲除子纤维素酶酶活的测定 | 第53-55页 |
| 5.6.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第53页 |
| 5.6.2 Cx酶酶活的测定 | 第53-54页 |
| 5.6.3 β-葡聚糖苷酶酶活的测定 | 第54-55页 |
| 5.7 讨论 | 第55页 |
| 5.8 本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
